阻断il-23信号促进小鼠h22肝癌生长的免疫学机制通过调节性t细胞抑制树突状细胞的成熟-the immunological mechanism of blocking il - 23 signal to promote the growth of mouse h22 liver cancer inhibits dendritic cell maturation through regulatory t cells.docx

华中 华中科技大学同济医学院硕士研究生毕业论文 PAGE PAGE 10 主要缩略词表 IL Interleukin 白细胞介素 IL-23R IL-23 receptor subunit 白细胞介素-23 受体亚基 sIL23Rc soluble IL-23 receptor chain 可溶性 IL-23 受体链 IFN-γ interferon γ γ干扰素 GAPDH Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenate 甘油醛-3-磷酸脱氢酶 CY cyclophosphamide 环磷酰胺 Tregs regulatory T cells 调节性 T 细胞 DCs dendritic cells 树突状细胞 TILs tumor infiltrating lymphocytes 肿瘤浸润淋巴细胞 IL-23 信号阻断促进小鼠 H22 肝癌的生长的免疫学机制：通过 调节性 T 细胞抑制树突状细胞的成熟 硕士研究生：张标 指导教师：黄波教授 中文摘要 目的：IL-23 是 IL-12 家族的新成员，通过 Th17 在自身免疫性疾病中发挥重要的 促炎作用，但是 IL-23 的抗肿瘤作用尚有争议。本研究将通过构建可溶性 IL-23 受 体蛋白链（sIL23Rc）表达载体 pcDNA3.1/sIL23Rc，通过尾静脉高通量流体动力 学注射法注射入荷瘤小鼠肝脏，使其体内表达以全身性封闭 IL-23，探讨 IL-23 对 肿瘤生长的作用及其免疫学机制。 方法：1、利用 RT-PCR 手段，扩增 IL-23 受体复合物的两个亚基胞外域的 cDNA 片段并在 IL-12RB1 片段 3’端引入连接肽 cDNA，利用 T-A 克隆获得高丰度的 IL-12RB1 和 IL-23R 的 cDNA 片段，将其与 pcDNA3.1 载体连接，获得真核表达 载体 pcDNA3.1/sIL23Rc，表达可溶性 IL-23 受体蛋白链（sIL23Rc），利用 Western blot 检测转染了该质粒的细胞培养上清中 sIL23Rc 的表达；利用 RT-PCR 检测 sIL23Rc 封闭 IL-23 的能力。2、通过尾静脉高通量流体动力学注射法将质粒注射 入荷瘤小鼠肝脏并表达 sIL23Rc 以封闭 IL-23，观察其对肿瘤生长的影响。3、利 用 RT-PCR 和 Western blot 检测 H22 肿瘤细胞系、肿瘤组织分离的新鲜 H22 细 胞和 H22 肿瘤组织中 IL-23R 的表达情况；使用裸鼠验证 IL-23 对肿瘤生长的作用 是否主要依赖于 T 细胞。4、利用流式细胞术检测经 sIL23Rc 封闭 IL-23 后荷瘤小 鼠脾脏和肿瘤浸润树突状细胞的成熟情况。5、使用低剂量环磷酰胺清除荷瘤小鼠 调节性 T 细胞后，观察 sIL23Rc 对肿瘤生长，利用流式细胞术检测树突状细胞的 成熟情况；利用 RT-PCR 和 ELISA 检测 sIL23Rc 对荷瘤小鼠肿瘤组织中 IL-17 表 达的影响。 结果：1、pcDNA3.1/sIL23Rc 能够表达可分泌的、有功能的 IL-23 受体蛋白链 （sIL23Rc）。2、sIL23Rc 能够促进小鼠 H22 肝癌的生长。3、IL-23 不能直接作 用于 H22 细胞；sIL23Rc 对荷瘤裸鼠 H22 肿瘤的生长没有影响。4、sIL23Rc 抑 制荷瘤小鼠脾脏及肿瘤浸润树突状细胞的成熟。5、清除调节性 T 细胞后，sIL23Rc 对 BALB/c 小鼠 H22 肿瘤的生长和脾脏及肿瘤浸润淋巴细胞中树突状细胞的成熟 没有影响；sIL23Rc 沉默荷瘤小鼠肿瘤组织中的 IL-17 的表达。 结论：sIL23Rc 以可溶性形式封闭 IL-23。sIL23Rc 可能通过调节 Th17 途径增强调 节性 T 细胞的作用，导致后者对树突状细胞成熟的抑制而促进肿瘤生长。我们的 实验结果支持 IL-23 具有增强抗肿瘤免疫的作用。 关键词：白细胞介素-23 可溶性 IL-23 受体蛋白链 肿瘤微环境 肿瘤调节性 T 细 胞 树突状细胞 英文摘要 Systemic blockade of IL-23 promotes murine H22 hepatocarcinoma growth by enhancing Treg-mediated immaturation of DCs Abstract Objective: IL-23 is a new member of IL-12 family. IL-23 can act through Th17 pathway in autoimmune diseases. But the effect of IL-23 on tumor g