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第13章 生物合成核酸类药物 核酸类物质药物一般可分为两大类： 一类具天然结构的核酸类物质， 另一类是自然结构碱基、核苷、核苷酸的结构类似物或聚合物。 前者是生物体合成原料或蛋白质、脂肪、糖生物合成与降解以及能量代谢的辅酶，这一类药物有助于改善机体的物质代谢和能量平衡，加速受损组织的修复，促使缺氧组织恢复正常生理机能，临床上已广泛使用于放射病、血小板减少症、白细胞减少症、急慢性肝炎、心血管疾病、肌肉萎缩等病症的治疗，包括肌苷、辅酶A、GTP、CTP、UTP、ATP、腺苷、辅酶I、辅酶Ⅱ等，多数是生物体自身能够合成的物质，具有一定临床功能，毒副作用小，基本都可经微生物发酵或从生物资源中提取。 后一类药物是治疗病毒感染性疾病、肿瘤的重要手段，也是产生干扰素、免疫抑制的临床药物。 正式用于临床的抗病毒核苷类药物有三氮唑核苷、叠氮胸苷、阿糖腺苷等。 核酸类物质生产方法有化学合成法、酶解法和发酵法三种。 化学合成法生产，工艺比较复杂，设备条件要求较高； 酶解法受到酶源及原材料的局限； 发酵法以糖质原料生产核苷酸类物质，符合食用习惯，生产成本低、效益高，特别是目前基因工程育种技术及高产优化控制技术的采用，使发酵法生产成本大大降低，优势更为明显。 13.1 肌苷的发酵法生产 1．概述 肌苷是近年来生产发展较快的一种生化药品，对不同类型的心脏病及肝脏病都有较好疗效，并具有无毒、无副作用的特点。 另外，它还是唯一能代替人体内辅酶A功能的药物。 肌苷经磷酸酯化后生成5`-肌苷酸，用作鲜味剂的前体物质。 主要生产国是日本，试验室产量已达80 g/L以上，我国实验室产量30 g/L左右，生产水平在20g/L左右。 肌苷化学名是次黄嘌呤核苷，是次黄嘌呤和核糖的缩合物，其磷酸酯为肌苷酸。 在次黄嘌呤核苷中，核糖连在N-9位置上，以糖苷键的形式连接在以呋喃形式存在的核糖第一位碳原子上，分子式为C10H12N4O5，相对分子质量为268.23。 肌苷为白色结晶或呈无水粉末状，无嗅，味微苦，熔点约为218℃，易溶于水，pH近中性。 在饱和水溶液中约含肌苷15g/L，在稀盐酸或氢氧化钠溶液中易溶，在氯仿、乙醇中不溶。 2．生产菌种 主要为细菌，如枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、产氨短杆菌、谷氨酸棒杆菌、谷氨酸小球菌、节杆菌、铜绿色假单胞菌、大肠杆菌等。 此外，一些酵母和霉菌也可产生肌苷。 3．培养基 斜面培养基：葡萄糖1.0％、牛肉膏1.4％、蛋白胨1.0％、酵母膏1.0％、氯化钠0.5％，pH7.0~7.2。 种子培养基：葡萄糖1.0％、酵母膏1.5%、蛋白胨1.0％、玉米浆0.5％、氯化钠0.5％，pH7.0~7.2。 发酵培养基：葡萄糖12％、酵母粉1.4％、硫酸铵1.3％、玉米浆0.5％、尿素0.2%、氯化钾0.6%、磷酸氢二钠0.5％、硫酸镁0.22％、碳酸钙2.0％、pH 7.0~7.2。 灭菌条件：斜面培养基0.1 MPa，20min，种子培养基及发酵培养基0.08MPa，15min。 4．生产工艺 5．发酵控制 碳源大多使用葡萄糖，在发酵生产中也可利用淀粉水解液。 常用氮源有氯化铵、硫酸铵或尿素等。 因肌苷的合氮量很高(20. 9％)，所以须供应足够的氮源，工业发酵常用氨水来调节pH，这样既可以供氮源，又可调节发酵液的pH。 磷酸盐对肌苷生成有很大影响。 采用短小芽孢杆菌的腺嘌呤缺陷型发酵时，可溶性磷酸盐如磷酸钾显著抑制肌苷累积，不溶性磷酸盐如磷酸钙可促进肌苷的生成。 采用产氨短杆菌变异株时，肌苷发酵不需要维持低水平无机磷，即使添加2％磷酸盐，也能累积大量肌苷。 肌苷生产菌株一般为腺嘌呤缺陷型菌株，培养基中须加入适量腺嘌呤，如酵母膏等。 由于腺嘌呤是肌苷酸的前体，而腺苷酸又是控制IMP生物合成的主要因子，所以加入腺嘌呤的多少，不仅影响菌体的生长，更影响肌苷积累。 腺嘌呤对肌苷积累最适浓度比菌体生长所需要的最适浓度小一些，称为亚适量。 氨基酸促进肌苷积累、节约腺嘌呤用量。 其中组氨酸是必需的，异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、甘氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸及赖氨酸等8种氨基酸也有促进作用。 除组氨酸外的其他8种氨基酸可以用高浓度的苯丙氨酸一种来代替。 氨基酸可通过促进菌体生长使肌苷产量增加。 发酵条件，如pH值、温度、通气搅拌等都是影响肌苷积累的重要因素。 肌苷积累的最适pH值为6.0~6.2； 最适温度对枯草杆菌为30℃，对短小芽孢杆菌为32℃； 供氧不足可使肌苷生成受到显著的抑制，而积累一些副产物； 通气搅拌可减少CO2对肌苷发酵的抑制作用。 6．肌苷的生理作用和药用价值 肌苷可直接透过细胞膜，进入人体细胞内，使处于低能缺氧状态下的细胞恢复正常水平，继续进行新陈代谢，并能活化丙酮酸氧化酶类，参与人体细胞蛋白质的合成，具有激活细胞、刺激代谢等作用。 当细胞