斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型分离株同源重复区hr5结构功能分析.docVIP

斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型分离株同源重复区hr5结构功能分析 　　摘要：对斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ（SpltNPVⅡ）基因组DNA中的同源重复区hr5的结构功能进行研究。结果表明，SpltNPVⅡ hr5大小为389 bp，含有3个64 bp不完全回文序列，回文序列的中心均含有1个PvuⅠ限制性酶切位点，并且存在1个与病毒基因组DNA复制相关的motif（CGATT）基序。瞬时表达分析表明，hr5在野生型病毒感染和未感染的细胞中均具有增强早期基因ie1启动子活性的功能；实时荧光定量PCR结果显示，hr5在野生型病毒作为辅助病毒时，具有基因组DNA复制起始原点的功能。研究证明SpltNPVⅡhr5具有复制起始原点和增强子的双功能作用。 　　关键词：斜纹夜蛾；核型多角体病毒；同源重?颓?；增强子 　　中图分类号：S433.4：Q78 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2017）08-0099-05 　　Abstract The structure-function of homlogous region 5 （hr5） from Spodoptera litura Nucleopolyhedrovirus Ⅱ（SpltNPVⅡ）was studied in this paper. The results showed that the length of hr5 is 389 bp consisting of three 64-bp imperfect palindromes，and each palindrome contains a PvuⅠ site in the center and one motif （CGATT）which related to the replication of genomic DNA of virus. A transent expression assay demonstrated that the expression of SpltNPVⅡ-ie1 promoter-driven luciferase gene was enhanced by hr5 in both infected and uninfected Spli221 cells. Real-time PCR confirmed that the hr5 could function as ori of viral DNA replication in infected cells with wild type virus as the helper virus.The study results indicated that SpltNPVⅡhr5 is bifunctional， having both ori and enhancer activities. 　　Keywords Spodoptera litura； Nucleopolyhedrovirus； Homologous region （hr）； Enhancer 　　斜纹夜蛾（Spodotera litura）是一种杂食性的重要农业害虫，全国各地均有分布。该虫广泛危害水稻、玉米、棉花、花生、烟草等数十种粮食和经济作物，近年来对蔬菜、花卉、草坪等的危害特别严重[1]。目前，在各种化学合成杀虫剂严重污染环境、农作物的高毒农药残留问题日显严重及害虫对化学杀虫剂的抗性日益增强的情况下，对斜纹夜蛾进行生物防治就显得尤为重要和迫切[2]。斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型（Spodotera litura nucleopolyhedrovirus，SpltNPVⅡ）分离株是一种繁殖率和毒力极强的病毒变异株，作为生物杀虫剂具有很高的研究价值和良好的应用前景。 　　1984年，Blinov等[3]最早报道了大蜡螟核型多角体病毒（Galleria mellonella multiple nucleopolyhedrovirus，GmMNPV）的BamHⅠ-H片段带有一个同源重复区（homologous repeat regions，hrs），即复制起始原点。之后，hrs作为基因组DNA复制起始原点（origin of replication，ori）在众多杆状病毒中得到证实。大量研究结果表明，hrs除作为DNA复制起始原点外，还具有较强的增强子功能[4-6]。家蚕核型多角体病毒（Bombyx mori nucleopolyhedrovirus，BmNPV）基因组中hr5不仅在宿主细胞中具有复制起始原点功能，在苜蓿尺蠖核型多角体病毒（Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus，AcMNPV）感染的非