出口禽肉中乙胺嘧啶残留量检验方法 征求意见稿.docVIP

SN/T ××××—×××× SN/T ××××—×××× PAGE 2 PAGE 1 ICS备案号：中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布××××-××-××实施××××- ICS 备案号： 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 ××××-××-××实施 ××××-××-××发布 进出口禽肉组织和内脏中乙胺嘧啶 残留量检测方法—HPLC-MS/MS法 Determination of pyrimethamine residues in poultry tissue and visceral for import and export——HPLC-MS/MS method （报批稿） SN/T ××××—×××× SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T ××××—×××× PAGE I 前 言 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由中华人民共和国国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准由中华人民共和国**出入境检验检疫局负责起草。 本标准主要起草人： 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 SN/T ××××—×××× PAGE 1 进出口禽肉组织和内脏中乙胺嘧啶残留量检测方法-HPLC-MS/MS法 范围 本标准规定了进出口禽肉组织和内脏中乙胺嘧啶残留量检测方法-HPLC-MS/MS法。 本标准适用于鸡肉、鸭肉、鸡肝等禽肉组织和内脏中乙胺嘧啶残留量测定。 方法提要 用乙腈-三氯甲烷混合溶液提取试样中残留的乙胺嘧啶，经振荡、离心后，取上清液浓缩后，经正己烷、乙腈-三氯甲烷混合溶液处理，离心、浓缩，最后用乙腈溶解，采用液相色谱串联质谱法检测，外标法定量。 试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。 乙腈：HPLC纯。 三氯甲烷：HPLC纯。 正己烷 无水硫酸钠 乙腈-三氯甲烷(10+1,V/V)：量取1000 mL环己烷，加入100 mL二氯甲烷，超声混匀。 2%硫酸钠溶液：称取2g硫酸钠，用重蒸馏水配成100mL溶液。 标准物质溶液：乙胺嘧啶(Pyrimethamine，CAS号：58-14-0)，浓度为1.0mg/mL的乙腈溶液。 标准储备液的配置：准确移取10mg标准物质溶液于10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，配制成浓度为1.0mg/mL的标准储备液，4 ℃下保存，有效期 标准工作溶液的配置：根据需要，试验时用乙腈稀释配成标准工作曲线的浓度为2，10，20，50，100μg/L。 试样制备与保存 试样制备 从所取全部样品中取出有代表性样品约200 g，切成小块，再用捣碎机 试样保存 将试样于-18℃保存，试验前取出放置于室温待测 仪器和设备 液相色谱串联质谱仪。 捣碎机。 涡旋混匀器。 离心机（最大转速6000 rpm）。 旋转蒸发仪。 氮气吹干仪。 振荡器。 电子天平：感量为0.000 5.9 均质器。 测定步骤 6.1 提取 称取2.00g样品于50mL具塞离心管，加入0.5mL硫酸钠水溶液和10mL乙腈-三氯甲烷（10+1）混合液，放入均质器中震荡提取20min后，6000r/min离心5min，移取上清液至另一只50mL离心管，再向原离心管中加入10mL乙腈-三氯甲烷（10+1）混合液，振荡提取20min，6000r/min离心5min，合并两次上清液于40℃ 6.2 净化 向6.1残渣中依次加入2mL2%硫酸钠水溶液和5mL正己烷，涡旋2min使残渣溶解，3000r/min离心5min弃去正己烷层后，加入5mL乙腈-三氯甲烷（1+2）混合液，涡旋2min，3000r/min离心5min后将下层有机相移入试管中，用氮气浓缩仪于40℃吹至近干后，用乙腈溶解定容至1.0mL，过0.45μm膜，于进样瓶中待测 6.3液相色谱串联质谱条件 色谱柱： C18（4.6*150mm*5μm）；进样量：10μL，流速：0.8mL/min液相梯度洗脱条件见表1： 表1 液相色谱梯度洗脱程序 时间 甲醇（%） 0.1%甲酸（%） 0.0 20 80 1.0 20 80 1.5 90 10 5.0 90 10 5.1 20 80 12.0 20 80 质谱条件：采用电喷雾离子源（ESI），通过正离子多反应监控扫描模式；离子源电压：5.5kV；离子源温度：500℃；N2作为雾化气、气帘气和辅助气，其中雾化气为7psi, 气帘气为9psi，辅助气流速为7L 表2质谱参数表 Precursor ion Product ions DP(V) CE(V) Dwell time(ms) 249.2 233.1 110 38 100 177.1 110 40 100 198.1 110 54 100 注： Precursor ion：母离子； Product ions：