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不同色谱柱的应用条件 摘要：反相HPLC 分析中色谱柱的选择性受到了越来越多的关注, 在这些色谱柱中, C18柱是目前最常用的色谱柱, 然而各种C18色谱柱在分离效果上也存在着较大差异, 因此能否找到合适的C18柱关系到整个实验的成败。本文对常用的色谱柱的特点、应用条件以及注意事项进行了详细的阐述。 高效液相色谱法 (HPLC) 作为各国药典收录的常规分析方法以其高效、灵敏和选择性好等特点广泛用于药物原料及其制剂的含量和杂质分析。在实际工作中, 对高效液相色谱法, 尤其是反相高效液相色谱法来说，色谱柱的选择是一项十分重要的工作, 能否找到合适的色谱柱, 关系到整个分析工作的成败。C18柱是目前最常用的色谱柱，市场上有600 多种C18色谱柱, 且不断有新的色谱柱出现。采用不同的色谱柱分析具体样品时，由于色谱柱选择性的差异，溶质的保留值、色谱峰之间的分离度甚至色谱峰顺序都可能出现较大的差异[1, 2]。下面我们就重点介绍一下实验中比较常用的不同品牌的C18色谱柱的特点、应用条件以及使用时的注意事项，以对我们的工作有更好的指导作用。 一、不同品牌的反相色谱柱的特点、应用条件以及注意事项 1、艾杰尔色谱柱 硅胶表面残余硅羟基的活性（酸性）、硅胶中的金属残留和硅胶表面的不均匀是导致极性化合物色谱峰型不对称，拖尾和重现性差的重要因素。纳艾杰尔科技创新的硅胶双层表面处理专利技术，可有效克服上述导致极性化合物分离不佳的因素的影响。硅胶双层表面处理技术原理如图 1 所示，硅胶 A 先用原硅酸酯 B 进行表面键合得到 C，C 进一步水解为 D，D 相对于初始的硅胶A，增加了一层新的表面（图 1 中 D的红色部分）。 新增加的表面层相比初始硅胶A的表面层有如下优点： i.新表面层硅羟基酸性大大降低（新增表面的硅羟基 pH=5.2，普通硅胶羟基 pH=3.5），硅羟基活性降低，对碱性化合物的二次保留效应大大减弱，碱性化合物的峰型更加尖锐对称。 ii.新表面层覆盖了初始硅胶中的金属残留，增加了硅胶表面纯度，屏蔽了残留金属对极性化合物的不利影响，峰型大大改善。 iii.新表面层覆盖了硅胶微晶形成过程中导致的表面不均匀，使得硅胶表面更加均匀，重现性更佳。 iv.新表面层具有更多的硅羟基，亲水性增加，可以使用100% 水或缓冲盐作为流动相，方法开发灵活性大大增加。 图 1硅胶双层表面处理技术原理 基于上述双层表面处理后的硅胶，博纳艾杰尔采用不同键合工艺，推出了各具特点的色谱柱，下图为艾杰尔色谱柱使用指南（图2）。 图2 艾杰尔色谱柱使用指南 Venusil MP?色谱柱的特点及应用条件 MP C18采用多官能团键合，进一步增加低活性硅羟基的数量，亲水性进一步增加，可以耐受100%水或缓冲盐，对酸性，碱性化合物均具有良好的分离效果，并可替代离子对方法，方便了LC-MS方法的开发。Venusil MP C18对酸性、碱性和中性化合物均有良好峰型。 应用条件：pH适用范围：1.5-9.0。 色谱柱特点：亲水性、通用性、良好的分离能力。 Venusil MP C18(2) 是在Venusil MP C18的基础上，优化填料性质，采用新型的键合工艺升级而来的一款通用型反相色谱柱。它完美平衡了亲水能力、反相保留能力、分离能力、耐污染能力的关系，为极性范围大的混合物样品提供了均衡的保留能力，对碱性化合物具有对称的峰型，因而具有较为通用的适用能力。该款色谱柱可满足大部分的色谱分析需求，同时受流动相pH 值、缓冲盐浓度的变化影响较小，可增加色谱行为的稳定性。 Venusil ASB色谱柱的特点及应用条件 Venusil ASB C18色谱柱专为低 pH(在pH=1 稳定)至中等pH下极性化合物的分离而设计。 ASB C18采用异丁基（如图3）空间位阻保护键合，无封尾，大基团的异丁基保护[3]，有效的延缓了酸性条件下键合相Si-O键的断裂，所以VenusilASB C18在低pH值条件下极其稳定（适用pH0.8~7.0），无键合相流失，具有极佳的LC-MS灵敏度，非常适合酸性流动相条件下方法开发。同时，VensuilASB C18键合相表面有更多的硅羟基，亲水性增加，可使用100% 水或缓冲盐为流动相。 Venusil ASB C18类似于Agilent的Zorbax SB-C18。 图3Venusil ASB C18 Venusil HILIC色谱柱的特点及应用条件 Venusil HILIC色谱柱表面键合中性亲水基团的新型固定相---中性的酰胺基团，可用于正相、反相和亲水液相色谱，适用于分离小分子糖等物质，较普通C18色谱柱，Venusil HILIC 色谱柱利用亲水作用色谱原理（见图4），更适合分离强极性、高水溶性、碱性有机化合物。 图4：丙烯酰胺键合硅胶与强极性化合物