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无患子总皂苷提取工艺及其抑菌活性研究 　　摘要：采用单因素和正交设计试验，研究无患子（Sapindus mukorossi）总皂苷的提取工艺，得出无患子总皂苷的最优提取工艺为乙醇体积分数70%，提取时间为3.5 h，温度为70 ℃，料液比为1∶5，在此条件下无患子总皂苷的提取率为21.23%。抑菌试验表明，无患子粉末、水提取液和乙醇提取液对稻瘟病菌的EC50分别为0.21、0.18、0.12 mg/mL。利用大孔树脂对无患子乙醇提取液除杂，结果表明抑菌活性部位主要集中于70%乙醇洗脱液部位，在浓度为0.05 mg/mL时，其抑菌活性达到95.94%。 　　关键词：无患子（Sapindus mukorossi）；皂苷；提取工艺；抑菌活性 　　中图分类号：TQ281 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2014）22-5511-04 　　无患子（Sapindus mukorossi）是无患子科无患子属的落叶乔木，国外广泛分布在日本、朝鲜等东南亚国家，国内各省皆有分布[1]。无患子在不同的地方有不同的叫法，在台湾被称为目浪树，在海南被称为苦患树，而在江西、广东和湖南都被称为肥珠子。无患子具有十分广泛的应用价值，其树型美观可以吸收汽车尾气；其种仁含油率高，是一种新型的制备生物柴油的原料[2]；其果实中的皂苷具有极强的非离子表面活性，可作为天然洗涤剂。此外，无患子还具有十分重要的医学价值，能够用于喉痹肿痛、咳喘、白带、疮癣、肿瘤等的治疗[3]。 　　现代研究表明，无患子果皮中含有大量的皂苷，主要是三萜皂苷类[4-7]。目前，关于无患子皂苷的提取主要以水提法为主，但水提法容易使无患子中其他杂质浸出，从而导致无患子皂苷纯度降低。魏玉凤等[8]研究了水提-大孔树脂吸附法提取，并用超滤法分离提纯无患子皂苷；饶厚曾等[9]介绍了微波萃取法提取无患子皂苷的工艺。上述研究虽然对无患子皂苷的提取提出了一些新方法，但因其溶剂消耗量大、能耗高和产品纯度低等缺点，不利于工业化生产。本试验采用单因素试验和正交试验的方法对无患子总皂苷的提取工艺进行了优化，同时研究了无患子总皂苷的抗稻瘟病菌（Magnaporthe oryzae）活性，以期为无患子皂苷的工业化生产提供参考，同时为开发新型植物源杀菌剂提供理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　无患子采自江西农业大学校园内，由江西农业大学生物资源保护与利用研究所分类鉴定。无患子果晾干后，去核，将果皮用粉碎机粉碎并过40目筛，密封保存备用。 　　稻瘟病菌由南昌市生物资源保护与利用重点实验室提供，齐墩果酸、香草醛、冰醋酸、高氯酸、D101大孔吸附树脂购于天津农药厂，无水乙醇购于国药集团化学试剂有限公司。 　　1.2 试验仪器 　　AR1530/C型电子分析天平（奥豪斯上海有限公司），旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），TU-1900型双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。 　　1.3 试验方法 　　1.3.1 标准曲线的制作 精密称取干燥的齐墩果酸10.0 mg，用甲醇溶解并定容至10 mL，备用；精密称取香草醛0.500 0 g，用冰乙酸溶解并定容至10 mL，备用；分别精密吸取齐墩果酸甲醇溶液0、40、80、120、160、200、240 μL于比色管中，每组3次重复，水浴加热溶剂，先后加入配好的香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL、高氯酸0.8 mL（显色剂），充分摇匀，于70 ℃水浴加热20 min，取出后立即浸入冰水浴中冷却2～3 min，加入5 mL冰乙酸，在540 nm波长处测定其吸光度。 　　1.3.2 提取液皂苷含量测定[10] 用移液枪吸取一定体积的提取液，按测定标准曲线的方法测定样品提取液的吸光度，以去离子水为空白对照。 　　1.3.3 单因素试验 称取无患子粉末5.00 g， 在不同提取时间、提取温度、料液比（m/V，g∶mL，下同）和乙醇体积分数下提取。分别考察上述各因素对无患子总皂苷提取率和浸出率的影响。提取率和浸出率的计算公式如下： 　　提取率=■×100% 　　浸出率=■×100% 　　1.3.4 正交试验 在单因素试验的基础上，对乙醇体积分数（A）、提取温度（B）、料液比（C）和提取时间（D）进行L9（34）正交试验，试验因素与水平见表1。 　　1.3.5 大孔吸附树脂纯化无患子皂苷 大孔吸附树脂的预处理按文献[11]方法进行。 　　上样：称取无患子粉末20.00 g，按正交试验所得最佳工艺进行提取，旋转蒸发浓缩后，吸取10 mL（浓度为0.22 g/mL）上样于预处理好的大孔吸附树脂柱内，预吸附1 h， 然后分别用2倍柱体积的去离子水、30%乙醇、70%乙醇和95%乙醇进行洗脱，分段收集洗脱液，测定各洗脱