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杜马斯燃烧法测定饲料粗蛋白实验教学改革初探
杜马斯燃烧法测定饲料粗蛋白实验教学改革初探
摘 要:本项目组成员在科研中测定饲料粗蛋白时,分别利用杜马斯燃烧法和凯氏定氮法进行比较,得到可以用杜马斯燃烧法替代以凯氏定氮法的结论,并尝试将其引入饲料分析实验课中,避免凯氏定氮法的安全隐患及废液污染等问题,使学生既具备扎实的实验基础,又能应用到现代仪器,提高就业竞争力。
关键词:饲料;粗蛋白;杜马斯燃烧法;凯氏定氮法;实验教学改革
粗蛋白含量是衡量?料原料和动物产品营养价值的一个重要指标,因此,准确测定动物饲料及其产品中的粗蛋白是动物饲养和营养的核心内容之一。本项目组成员除了实验课上指导学生做利用凯氏定氮法测定大量的饲料粗蛋白的实验外,还承担部分科研及对外检测的测定饲料粗蛋白的任务。凯氏定氮法是经典的测定饲料粗蛋白的方法,但由于其测定时间长,需要使用危险化学试剂,容易造成环境污染,因而随着人们对安全和环境问题的日益关注,分析设备的不断改进,本项目组尝试采用杜马斯燃烧法逐渐替代传统凯氏定氮法的可行性。我们经过在科研生产中大量的实验摸索,比较两种方法对实验结果及对操作人员和环境的影响,得出结论,杜马斯法可以作为饲料粗蛋白测定的优选方法替代凯氏定氮法。本文从饲料分析实验课教学改革角度分析杜马斯燃烧法替代凯氏定氮法测定饲料粗蛋白的必要性与可行性。
一、粗蛋白测定方法的发展趋势
饲料分析实验课是畜牧专业和水产养殖专业的一门重要的专业基础实验课,具有很强的实践性和操作性,内容广,实应性强。饲料企业和畜牧养殖业用人单位对毕业生的需求量逐年增加,为了适应人才市场对高级专门人才的需求,本项目尝试对饲料分析实验课的实验项目进行开发与调整,在保留经典实验项目的基础上,将仪器引入到课程里,让学生既能掌握基础的实验方法,又能接触到最新的实验技术。随着饲料行业的迅速发展,饲料的品质控制和安全已成为饲料生产厂家必不可少的关键环节,饲料粗蛋白的测定是饲料分析实验课的一个重要的实验项目,也是饲料生产与科研中必不可少的检测项目,本项目将原有的凯氏定氮法转变为杜马斯燃烧法,旨在减少环境污染及安全隐患,顺应科技发展,培养具备就业竞争力的农业院校毕业生。这仅是饲料分析实验课的一个尝试,今后还将继续摸索实验教学改革,力争将传统的饲料分析实验课程转变成适应行业发展需求的综合创新型实验课。
粗蛋白的测定方法主要有凯氏定氮法、杜马斯燃烧法、分光光度法和滴定法等。分光光度法简单迅速,灵敏度低。滴定法在操作过程中主要是靠实验者肉眼进行判断,所以容易产生误差。目前,国内高校粗蛋白的检测方法主要是经典的凯氏定氮法(GB/T 6432―1994),也是国家标准规定的方法,通过测定总氮量来计算蛋白质含量。传统的凯氏定氮装置需要人工进行仪器洗涤、安装、试剂添加、滴定等步骤,过程复杂,操作繁琐,耗时耗力且误差来源较多,尤其不利于大批量样品的检测。与传统装置相比,近代的凯氏定氮仪实现了部分测定的自动化,可通过编程操作,不仅提高了测定效率及测定结果的准确度和精密度,而且节省了人力物力,因而得到广泛的应用。但还是需要在样品前处理消化过程中使用强酸、强碱,操作复杂、费时,产生二氧化硫等对人体有害且污染环境的酸雾。随着人们环保意识的增强,开始寻求新的检测方法代替凯氏定氮法,近年来杜马斯法在我国也已被标准化,作为饲料原料、谷类豆类、粮食及制品等粗蛋白含量的测定方法[3-6]。但是,由于杜马斯燃烧法需要较高的前期投资,而且人们已经习惯原有的凯氏定氮法,利用杜马斯法测定还没有普及。杜马斯燃烧法的测定原理是将待测样本在纯氧(≥99.99%)环境中高温燃烧,将其所含的有机氮和无机氮全部转化成氮的氧化物后被还原剂还原成氮气。最后,用TCD 检测器检测氮气产量,在短时间内准确地测定出样品的总氮含量。近年来,国内外学者针对凯氏法与杜马斯燃烧法进行了大量的实验,研究结果表明杜马斯燃烧法不仅能够代替凯氏法进行实验室分析,而且准确度和稳定性都优于凯氏法。杜马斯燃烧法前处理简单、省时,能够自动连续大批量检测,具有环境友好、安全等特点,是未来饲料粗蛋白测定的发展趋势。
二、杜马斯燃烧法和凯氏定氮法测定饲料粗蛋白实验方法的比较
Flash2000杜马斯定氮仪(thermo),氦气,二氧化碳(99.99%),氧气(99.99%),氧化剂,吸附剂。
凯氏定氮仪(新嘉),硫酸,盐酸,硼酸,硫酸铜,硫酸钾,氢氧化钠,甲基红,溴甲酚绿。
1.杜马斯燃烧法
开机,稳定后校准。称取30mg样品置于锡箔纸中,并紧密包裹、压实,置于自动落样器内。在高温燃烧管中充分燃烧,产物(NOx)被载气运送至还原炉中,经铜和钨还原生成的氮气除去水后经检测器(TCD)检测,标准曲线计算定量。在仪器中,根据样品的质量和校正曲线形成的检测信号,得出试样中
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