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氨基酸对猪手工克隆重构胚胎发育效果影响 　　摘要：为了探讨氨基酸对猪手工克隆（HMC）重构胚发育效果的影响，比较了必需氨基酸（EAA）和非必需氨基酸（NEAA）对卵母细胞的成熟状况以及对猪HMC重构胚胎发育潜能的影响。结果表明，成熟培养液中添加EAA、NEAA及EAA+NEAA之间的成熟率差异不显著，但均显著高于空白对照组（P0.05）；胚胎培养液中添加EAA、NEAA及空白对照组的卵裂率都显著高于EAA+NEAA（P0.05）；囊胚率及细胞总数，NEAA组显著高于空白对照组及EAA+NEAA组、EAA组（P0.05）。 　　关键词：氨基酸；猪；重构胚胎；发育效果 　　中图分类号：S828 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2018）06-0108-03 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2018.06.027 　　Abstract： Effect of developmental potency of reconstructed embryos on pig handmade clone（HMC） of amino acid was investigated. In this study，we compared with the effect of the essential amino acid（EAA） and the essential amino acid （NEAA） on oocyte maturation rate and porcine HMC reconstructed embryos developmental potency. The results showed that the difference of maturation rate was not significant between the group of EAA，NEAA and EAA+NEAA in maturation medium，yet was significantly higher than the control group（P0.05）；the cleavage rate of EAA group， NEAA group and the control group was significantly higher than EAA+NEAA group in embryo culture medium（P0.05），as for the blastocyst rate and the total number of cells，the group of NEAA was significantly higher than the group of control， EAA+NEAA，EAA（P0.05）. 　　Key words： amino acid；porcine；reconstructed embryos；developmental potency 　　随着猪胚胎工程的发展，可以改良品种、培育抗病猪种、提高肉质、生产转基因猪或基因组修饰猪、制备人类疾病模型、进行器官移植、生产药物蛋白、研究发育机理等[1]。胚胎的体外培养是猪胚胎工程的主要环节之一，无论是体外受精（IVF）、核移植技术还是基因敲除，所生产的胚胎都要经过体外培养，发育到适当的阶段才能进行后续的研究。影响猪胚胎体外发育的因素有很多，比如渗透压大小[2]、氧化应激反应[2]、螯合剂[3]、能量基质、氨基酸[4]等。而其中卵母细胞体外培养的成熟情况又是至关重要的，直接影响到后期胚胎的发育。有关氨基酸对猪卵母细胞的体外成熟及早期胚胎体外发育效果影响的报道鲜见，本试验探讨不同氨基酸浓度对猪卵母细胞体外成熟效率以及对手工克隆重构胚胎发育效果的影响，从而优化猪HMC的技术体系。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 主要试剂 胎牛血清（FBS）、TCM-199粉剂、DMEM粉剂购置于美国Gbico公司，激素eCG、hCG购置于美国Sigma公司，其他化学试剂如无特殊说明均购置于美国Sigma公司。 　　1.1.2 仪器 细胞融合仪型号：ECM2001、融合槽型号：BTX 450、胚胎积聚针型号：DN-10式、卵母细胞成熟培养皿：35 mm及60 mm 塑料平皿、去核切割刀自制、胚胎培养皿：四孔板。 　　1.2 方法 　　1.2.1 卵母细胞的成熟培养 取卵巢表面2～6 mm的卵泡，于试管中静置，弃去上清，留沉淀部分分装。挑选含有3层及以上有颗粒/卵丘细胞包被、折光性良好的卵丘卵母细胞复合体（COCs），放入成熟液中（含10 IU/mL hCG+10 IU/mL eCG）培