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植物二氢黄酮醇―4―还原酶基因研究进展 　　摘 要 二氢黄酮醇-4-还原酶（DFR）是花青素生物合成途径中的关键酶，在花色的修饰中起重要作用，目前，已从多种植物中分离得到。从DFR基因的结构和作用机制、底物特异性、时空表达模式及花色修饰等方面进行了概括和总结，为DFR基因的进一步研究和利用提供理论依据。 　　关键词 二氢黄酮醇-4-还原酶；花青素；基因工程；调控机制 　　中图分类号：Q943.2 文献标志码：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2016.21.110 　　花色是评定观赏植物品质最重要的因素之一，对于花卉商品性和价值性起着决定性的作用。花色主要由类黄酮，类胡萝卜素，甜菜色素三种类型的色素组成[1，2]。类黄酮中的花青素是影响花色的主要色素，赋予花和果实从橘色到蓝色的所有颜色，如红色、粉色、蓝色和紫罗兰色等[3-5]。二氢黄酮醇4-还原酶（Dihydroflavonol 4-Reductase，DFR）是花青素代谢生化合成中的关键酶，是决定植物花色和果色从无色到有色的重要控制点，决定植物的花、果实、叶片等器官的着色[6]。因此，研究DFR基因的作用机理对于花色形成分子机制有重大意义。 　　1 DFR基因的结构和作用机制 　　二氢黄酮醇4?C还原酶（DFR）是花色素苷生物合成途径中的关键节点基因，属于NADPH 依赖性短链还原酶家族或者是DFR亚家族，是单基因编码。这个亚家族的成员由肉桂酸、氧化还原酶为代表。它们都含有一个高度保守的NADPH（还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐）结合位点“VTGASGFVGSWLVMRLLEHGY”和一个由“TVNVEEKQKPVYDETCWSDVDFCRRV”组成的底物特异性结合区。此区域中第134位氨基酸和第145位的氨基酸会直接决定底物的特异性，并且在不同植物中相对保守[7]。DFR用NADPH作为辅因子催化二氢黄酮醇减少，从而生成相应的白花色素，这些无色花色素是花青素和原花青素的前体物。 　　在花青素合成途径中，DFR决定花青素苷最终的颜色，是花青素生物合成途径的关键酶（见图1）。分别催化二氢山奈酚（Dihydrokaempferol，DHK）、二氢槲皮素（Dihydroquercetin，DHQ）和二氢杨梅素（Dihydromyricetin，DHM）生成无色花葵素（Leucopelargonidin）、无色花青素（Leucocyanidin）和无色翠雀素（Leucodelphinidin），无色的DHK、DHQ和DHM进一步在DFR 的催化下将上述产物还原成不稳定的无色花色素（Leucoanthocyanidin） [8，9]。 　　2 DFR基因的分离 　　1985年，O Reilly等从玉米和金鱼草中利用转座子标签法将DFR分离出来 。随后，在1989年，Beld等又以金鱼草DFR表型突变基因为探针分离了矮牵牛DFR基因。现已从拟南芥、非洲菊、玫瑰、兰花、百合、水稻、葡萄、紫色甘薯和草莓等植物中分别分离了DFR基因。Nakatsuka A.等对杂种百合花CHI和DFR基因的时空表达进行了研究，结果表明：LhDFR基因仅在花色素苷着色组织中表达，并且调控花器官的显色模式。 　　3 DFR基因的底物特异性 　　由于DFR对底物的特异性和表达水平不同，使植物呈现出不同的花色和果色。DFR可以催化三种无色的二氢黄酮醇底物，这三种无色的二氢黄酮醇底物为DHK、DHQ、DHM，形成无色花青素。三种DFR的底物的结由于B苯环羟基数不同底物亲和性有差别。例如，矮牵牛中DFR优先催化DHM，生成无色花翠素，其次催化DHQ，然而对DHK没有转化作用，因此，自然界中缺乏橙色的矮牵牛品系[10]；非洲菊中，DFR能同时催化DHK、DHQ、DHM三种底物，因此非洲菊中存在天竺葵色素；兰花中，DFR能有效的催化DHQ和DHM，但是却不能利用DHK。DFR第134位的氨基酸残基直接决定底物的特异性。对蔓越橘的研究表明，第134位氨基酸残基突变后，就会改变 DFR 的作用底物。 　　4 DFR基因的时空表达特性 　　不同植物中的DFR基因，在不同发育期和不同组织中时空表达特性有所不同。研究表明，矮牵牛中的3个DFR基因（DFRA、DFRB、DFRC），DFRA在花冠、花药和种子中高表达，在胚珠和茎中低表达[11]裂叶牵牛突变株DFR-B（J）基因由于含有转座因子Tpn1，此因子从DFR-B中去除后会引起体细胞突变，因而造成花色的多样性；亚洲百合的2个品种中，DFR基因在粉红色被片带有斑点的“Montreux”植株的花被片、花药、花丝、雌蕊和红色的鳞片中大量表达，然而在黄色被片无斑点的“Connecticut King”植株中仅在着色的在花药和鳞片