氢化可松在细胞共培养体系中对黑素合成影响.docVIP

氢化可松在细胞共培养体系中对黑素合成影响 　　【摘要】目的 研究氢化可的松对人表皮共培养体系（黑素细胞与角质形成细胞）酪氨酸酶活性及黑素生成的影响。 方法 培养人表皮黑素细胞和人表皮黑素细胞与角质形成细胞共培养体系，利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)还原法测定细胞活力，测定酪氨酸酶活性，475nm 比色法测定黑素含量。 结果 10-7mol/L、10-6μmol/L和10-5mol/L氢化可的松对于黑素细胞及共培养细胞酪氨酸酶活性及黑素生成均有较强的剂量相关性增强作用， 10-6μmol/L和10-5mol/L氢化可的松与对照组相比有显著差异（p0.01）。结论 氢化可的松对于共培养体系酪氨酸酶活性及黑素生成有较强的剂量相关性增强作用。 　　【关键词】 氢化可的松 黑素细胞 角质形成细胞 共培养 　　【Abstract】Objective To study the effects of hydrocrtison on the tyrosinase activity and melanogenesis in co-culture model of human melanocytes and keratinocytes. Methods The model of co-culture of human melanocytes and keratinocytes was cultured and MTT was used to measure the proliferation of melanocytes and the co-cultures.The tyrosinase activity and melanin content were measured. Results The melanin synthesis and tyrosinase activity were clearly enhanced by hydrocrtison in a dose-dependent manner at concentrations of 10-7mol/L、10-6μmol/Land 10-5mol/L in both melanocytes and co-cultures. 10-6μmol/Land 10-5mol/L of hydrocrtison showed statistically significant suppression (p0.01) than the control.Conclusion Hydrocrtison exhibits a a dose-dependent enhancing effects on melanin synthesis and tyrosinase activity in co-cultures of human melanocytes and keratinocytes. 　　【key words 】Hydrocrtison Melanocte Keratinocyte Co-culture 　　【中图分类号】R722.12 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949(2014)07-0054-02 　　 　　白癜风是指后天获得的色素完全脱失的一种皮肤病，近年来其发病有上升趋势。白癜风虽然不直接危害患者生命，但是泛发严重的白癜风会对患者心理产生严重的损害，因此针对白癜风的有效治疗就很有必要，但是目前临床尚无根治白癜风的特效疗法。其发病机制涉及遗传、免疫、黑素细胞自身死亡以及神经等多方面因素，尚无定论。临床上无论内服还是外用糖皮质激素都可以有效治疗白癜风，本研究在人表皮黑素细胞和角质形成细胞共培养体系中研究氢化可的松对于黑素合成的影响，试图揭示糖皮质激素治疗白癜风的机制。 　　材料和方法 　　1 材料：氢化可的松：购自中国药品生物制品检定所，氢化可的松溶解在0.1%乙醇中，-20oC保存，实验时用培养基调制最终浓度； M154基础培养基、角质形成细胞生长添加物购自Cascade Biologicals，胎牛血清购自杭州四季青公司，其它（氢醌、二甲基亚砜（DMSO）、10－8mol/Lα－MSH、四甲基偶氮唑蓝（MTT）、1％抗生素/抗真菌溶液、1μg/mL转移因子、中性酶、胰酶、1μg/mL 维生素E、5μg/mL 胰岛素、0.6ng/mL人碱性成纤维细胞生长因子、10－9mol/L ET-1）购自Sigma公司。 　　2 实验方法 　　2.1皮肤来源：均来源于中国青少年男性常规包皮环切术后的包皮。 　　2.2 黑素细胞培养：细胞培养参考以前方法进行［1］。 　　2.3共培养体系的建立：参见我们已报道文献［2］,简述如下：首先分别培养原代角质形成细胞和原代