桑菊饮抗菌及对小鼠免疫功能影响初步研究.docVIP

桑菊饮抗菌及对小鼠免疫功能影响初步研究 　　【摘 要】 目的：观察桑菊饮的抗菌作用和对小鼠免疫功能的影响，探讨其治疗上呼吸道感染等病症的机制。方法：采用体外抗菌试验检测桑菊饮对不同细菌的最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）；将小鼠随机分为生理盐水对照组、桑菊饮高/低剂量组，以生理盐水和不同剂量桑菊饮连续灌胃7d，检测各组小鼠免疫器官指数、脾淋巴细胞增殖能力和腹腔巨噬细胞吞噬能力。结果：桑菊饮对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎链球菌、肺炎克雷伯菌均有抑制作用，对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的抑菌作用最强，MIC、MBC均为50mg/ml和100mg/ml。与生理盐水对照组比较，桑菊饮能显著提高小鼠胸腺、脾脏指数，增强淋巴细胞增殖能力和巨噬细胞的吞噬功能（P0.05）。结论：桑菊饮具有抗菌和增强机体免疫功能的活性，该活性是防治上呼吸道感染等症的作用之一。 　　【关键词】 桑菊饮；抗菌；免疫功能 　　【中图分类号】R258.5 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2016）01-0016-02 　　桑菊饮出自清代《温病条辨》，由桑叶、菊花、连翘、苦桔梗等八味中药组成，为辛凉解表之剂，具有宣肺止咳、疏风清热的功效，临床用于外感风热、咳嗽初起之证，如上呼吸道感染、急性气管炎等均可加减运用。临床研究表明，桑菊饮对上呼吸道感染、咳嗽、支气管炎等病症具有显著疗效[1-4]，但对其作用机制的研究报道较少。本研究拟通过桑菊饮的抗菌试验和对小鼠免疫器官指数、脾淋巴细胞功能和吞噬细胞吞噬能力的检测，探讨该方药防治上呼吸道感染的作用机制，为临床应用提供实验依据。 　　1 材料 　　1.1 药材 桑叶、菊花、薄荷、苦桔梗、杏仁、连翘、苇根、生甘草均购自同仁堂贵阳药店，经鉴定为正品。按常规方法用水提取、浓缩，调整浓度为0.8g生药/ml，滤过除菌后置4℃冰箱备用。 　　1.2 试剂 营养肉汤培养基（批号：131010）、营养琼脂培养基（批号：130731）购自杭州天和微生物试剂有限公司；S.S琼脂培养基（批号：120725，北京陆桥技术有限责任公司）；RPMI1640培养基、胎牛血清（美国GIBCO公司）；刀豆蛋白A（美国Sigma公司）；MTT（美国Amkesco公司）。 　　1.3 仪器 AB135-S型电子天平（梅特勒托利多上海公司）；3131型CO2培养箱（美国Thermo公司）；DG3021酶联免疫检测仪（美国BIO-TEK公司）；生物显微镜（日本Nikon公司）。 　　1.4 菌种 金黄色葡萄球菌（ATCC25923）、大肠埃希菌（ATCC25922）、铜绿假单胞菌（ATCC27853）、肺炎链球菌（ATCC49619）、肺炎克雷伯菌（ATCC700603）均购自中国普通微生物菌种保藏管理中心。 　　1.5 实验动物 SPF级昆明种小鼠24只，体重（20±2）g，雌雄各半，购自重庆腾鑫比尔实验动物销售有限公司，动物合格证：SCXK（军）2012-0011。 　　2 方法 　　2.1 体外抗菌试验 　　2.1.1 菌液的制备[5] 采取十倍稀释法，肺炎链球菌以10% 胎牛血清营养肉汤培养基37℃培养18 h，以相同培养基1∶[KG-*3/5]10稀释为试验菌液；其他细菌以营养肉汤培养基增菌培养后，制成1×103细菌悬液。 　　2.1.2 最低抑菌浓度（MIC）测定 采用二倍稀释法，用相应液体培养基稀释药物，共8个药物浓度，分别为800、400、200、100、50、25、12.5、6.25mg/ml，依次加入24孔细胞培养板，1ml/每孔，各孔加入试验菌液50 μl，并设菌液和培养基对照孔，37℃培养18 h，肉眼和倒置显微镜下观察有无细菌生长。以能抑制细菌生长的药物最高稀释度为最低抑菌浓度（MIC）。 　　2.1.3 最低杀菌浓度（MBC）测定[6] 分别取上述无细菌生长孔内的培养物100 μl接种于相应固体琼脂平板培养基上，37℃培养24 h，观察结果。以菌落数少于5个的药物最高稀释度为该药的最小杀菌浓度（MBC）。 　　2.2 对小鼠免疫功能的影响 　　2.2.1 动物分组及给药 小鼠购回适应性喂养3 d后，随机分为生理盐水对照组、桑菊饮高剂量组、桑菊饮低剂量组，每组8只。高、低剂量组分别按10 g/kg 和5 g/kg（体重）灌胃，每天2次，连续7d。生理盐水对照组代以等体积生理盐水。 　　2.2.2 免疫器官指数测定 末次给药5 h后，脱颈椎处死小鼠，称量小鼠体重，取腹腔液后，无菌分离小鼠的胸腺和脾脏，于电子天平上称重。免疫器官系数=免疫器官重量?M体重。 　　2.2.3 脾淋巴细胞的制备 将分离的脾脏置于200目的筛网研磨，收集细胞悬液，4℃，600r离心8