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榛蘑粗多糖碱提取工艺研究 　　摘要：本实验通过单因素试验和L9(34)正交试验，对榛蘑中可溶性粗多糖的提取工艺过程中的料液比、温度、水提时间、碱提时间进行了研究，结果显示温度是影响多糖提取率的关键因素，最佳工艺为料液比1：30，温度60℃，水提时间4h，碱提时间48h，在最佳提取工艺时，榛蘑多糖的提取率为65.4% 。 　　关键词：榛蘑 碱提多糖 提取工艺 　　 　　 多糖又称多聚糖（Polysaccharide）,是由10个以上单糖以糖苷键连接而成的一大类聚合物。它广泛存在于动物、植物和微生物体内。多糖具有多种包括抗肿瘤、抗突变、降血脂、抗菌素病毒、促进免疫等活性生物功能，以及抗氧化、抗衰老、保肝等作用。 　　 现代医学研究表明，榛蘑具有抗防癌、防治病毒性疾病、降低胆固醇、防止动脉硬化、稳定血压等功能，故是一种理想的医疗保健品。近年来对多糖提取工艺的研究方法较多，如热水浸提法、稀碱液浸提法、稀酸液浸提法。本文采用稀碱液浸提法。 　　 1、实验部分 　　 1.1仪器、试剂与材料 　　 榛蘑：购于内蒙古海拉尔地区。 　　 试剂：无水乙醇、95%乙醇、蒽酮、浓硫酸、萘酚、过氧化氢、氯仿、正丁醇、葡萄糖等。0.1mol/L氢氧化钠溶液，浓盐酸等。 　　 微型植物试样粉碎机、电子天秤、SHB-III型循环水式多用真空泵、98-1-B型电子调温电热套、数显恒温水浴锅、752N型紫外可见分光光度计、WMK-02型电热恒温培养箱。 　　 1.2多糖的提取流程 　　 1.2.1榛蘑的前处理 　　 称取购买的榛蘑,放入水中洗净, 60℃烘干至恒重,用粉碎机粉碎得榛蘑粉末,装瓶,干燥处中保存备用。 　　 1.2.2 榛蘑多糖的分离提取 　　 首先,称取5克榛蘑,向其中加入一定量的水,在一定温度下加热数小时。然后抽滤,将滤液保存。残渣倒入烧杯中,加入200ml，0.1mol/L氢氧化钠溶液，静置一段时间，重复两次。然后将滤液合并，调PH为7.0。滤液浓缩，在浓缩的同时加入过氧化氢，这样可以除去色素。再加入1/4糖溶液体积的Sevage试剂，摇动10分钟，再静置一天。除去蛋白的糖溶液醇沉，4℃静置一天。醇沉后用无水乙醇、乙醚洗涤，将得到的沉淀干燥即得去蛋白的粗多糖产品。 　　 要得到较高的提取率，就必须选择合适的提取条件。本试验分别考察了水浸提的料液比、水浸提的温度、水浸提的时间及碱浸提的时间对提取样品中多糖含量的影响。料液比采用1：15、1：20、1：30、1：40、1：50五个水平，浸提的温度采用60℃、80℃、90℃、100℃四个水平，水浸提时间采用1h、2h、3h、4h、5h五个水平，碱浸提时间6h、12h、24h、48h、60h五个水平分别进行单因素试验。 　　 1.3粗多糖中蛋白质的去除 　　 本试验采用Sevage法脱蛋白。Sevage是利用蛋白质遇有机溶剂变性而不溶于水的特点而分离除去。将适当浓缩的提取液加入到分液漏斗中，再按提取液体积的1/4的量加入Sevage试剂（三氯甲烷：正丁醇=4：1，体积比），振荡，静置，分离，直至无乳白色变性蛋白质析出为止。 　　1.4粗多糖中色素的去除 　　 采用过氧化氢脱去色素，脱色效果良好，将原先棕褐色的多糖变为乳白色多糖。 　　 1.5粗多糖中多糖含量的测定 　　 本试验采用蒽酮―硫酸法测定总的多糖含量。精确称取0.1g，0.2g，0.3g，0.4g，0.6g，0.8g干燥葡萄糖，用蒸馏水分别定容至1L，得6个不同浓度的葡萄糖标准溶液。分别加入硫酸5ml和蒽酮溶液2ml，用蒸馏水作对照，测得620nm处的吸光度。 　　 2、结果与讨论 　　 2.1标准曲线的制备 　　 在试验条件下，以浓度（C）为横坐标，以吸光度（A）为纵坐标作图，得标准曲线。 　　 2.2水浸提的料液比、温度、碱提时间、水提时间对榛蘑多糖提取率的影响 　　 2.2.1料液比的影响（温度60℃，水提时间4h，碱提时间48h） 　　 试验结果显示：料液比的上升会增加多糖的溶出量，1：30以后，溶出量的幅度趋于下降。 　　 2.2.2温度的影响（料液比1：30，水提时间4h，碱提时间48h） 　　 温度单因素试验表明：温度对榛蘑多糖的提取率有显著的影响，温度的上升伴随着多糖提取率的下降及显著下降，在60℃条件下多糖的提取率是100℃时提取率的两倍还多。 　　 2.2.3 水提时间的影响（料液比1：30，温度60℃，碱提时间48h） 　　 水提时间单因素试验显示：随着水浸提时间的增加，榛蘑中多糖的提取率也有所增加，但4 h以后开始下降。 　　 2.2.4碱提时间的影响（料液比1：30，温度60℃，水提时间4h） 　　 碱提时间单因素试验显示：随着碱浸提时间的增加，榛蘑