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枣试管苗POD同工酶分析 　　摘要：采用聚丙烯酰胺垂直板不连续凝胶电泳技术，对枣（Ｚｉｚｉｐｈｕｓ ｊｕｊｕｂｅ Ｍｉｌｌ．）试管苗叶片ＰＯＤ同工酶进行了研究。结果表明，６个枣品种试管苗共产生了１３条酶带，其中相同迁移率的酶带为９条；京枣共表现出１３条酶带，骏枣和宿萼酸枣均表现出１１条酶带，狗头枣、木枣、晋枣均表现出９条酶带。 　　关键词：枣；试管苗；ＰＯＤ同工酶 　　中图分类号：Ｓ６６５．１；Ｑ９４３．１；Ｑ５５４＋．６文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０11）16－3416-02 　　 　　Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ Ｉｓｏｅｎｚｙｍｅ ｏｆ Ｚｉｚｉｐｈｕｓ ｊｕｊｕｂｅ Mill. ｗｉｔｈ Ｔｕｂｅ Ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ 　　 　　ＱＩ Ｘｉａｎｇ－ｙｉｎｇ，ＣＨＥＮ Ｚｏｎｇ－ｌｉ，ＭＩＡＯ Ｙｕ－ｗａｎｇ，ＸＩ Ｚｅｎｇ－ｊｕｎ，ＺＨＡＯ Ｙｕ 　　（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｙａｎ’ａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｓｈａaｎｘｉ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ＆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｃｏｎｖｅｒｓａｔｉｏｎ ＆ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，Ｙａｎ’ａｎ ７１６０００， Ｓｈａａｎｘｉ， Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ peroxidase（ＰＯＤ） ｉｓｏｅｎｚｙｍｅ ｉｎ ｓｉｘ ｖａｒｉｅｔｉｅｓ ｏｆ Ｚｉｚｉｐｈｕｓ ｊｕｊｕｂｅ Ｍｉｌｌ． ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ ｂｙ ｖｅｒｔｉｃａｌ ｂｏａｒｄ ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ １３ ｅｎｚｙｍｅ ｂｅｌｔｓ ｗｅｒｅ ｐｒｏｄｕｃｅｄ； 9 ｌｉｎｅｓ ｏｆ ｔｈｅｍ ｗｅｒｅ ｔｈｅ ｓａｍｅ． Ｊｉｎｇｚａｏ ｈａｄ １３ ｅｎｚｙｍｅ ｂｅｌｔｓ； Ｊｕｎｚａｏ ａｎｄ Ｓｕｅ＇ｓｕａｎｚａｏ ｈａｄ １１ ｅｎｚｙｍｅ ｂｅｌｔｓ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ； Ｇｏｕｔｏｕｚａｏ，Ｍｕｚａｏ ａｎｄ Ｊｉｎｚａｏ ｈａｄ ９ ｅｎｚｙｍｅ ｂｅｌｔｓ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｚｉｚｉｐｈｕｓ ｊｕｊｕｂｅ Ｍｉｌｌ．； tube seedling； ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ（POD） ｉｓｏｅｎｚｙｍｅ 　　 　　枣（Ｚｉｚｉｐｈｕｓ ｊｕｊｕｂｅ Ｍｉｌｌ．）为鼠李科（Ｒｈａｍｎａｃｅａｅ）枣属（Ｚｉｚｉｐｈｕｓ Ｍｉｌｌ．）植物，为我国特产树种［１］。原产地为陕西省黄河沿岸，因其具有抗旱、耐瘠、适应性强等特点，一直被誉为铁杆庄稼。ＰＯＤ同工酶是一类氧化还原酶，能催化很多生化反应，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用［２］。植物体中含有大量的ＰＯＤ同工酶，是活性较高的一种酶。它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化都有关系。枣ＰＯＤ同工酶研究已有报道［３－５］，但对枣试管苗ＰＯＤ同工酶的研究尚未见报道。近年来，枣通过试管苗进行快繁育种的研究报道很多［６－８］，但有关试管苗和大田苗生活力与生产能力的比较研究报道很少。本研究通过对枣试管苗ＰＯＤ同工酶进行研究，旨在探讨枣人工繁育与自然繁育对枣生活能力的影响差异，以期为生产上针对试管苗生活力与生产能力的特点制定栽培技术提供依据。 　　１材料与方法 　　供试枣品种分别为狗头枣、木枣、晋枣、骏枣、宿萼酸枣和京枣，由陕西省红枣繁育工程重点实验室提供各品种的试管继代苗。试管苗培养按陈宗礼等［７］、齐向英等［８］的方法，将６个枣品种试管苗分别培养３０ ｄ后，取叶片，提取酶液。 　　酶液粗提于组培培养室日光灯开启前，分别称取枣品种试管苗叶片１ ｇ，加２ ｍＬ样品提取液，在预冷研钵中研磨，并分３次共用８ ｍＬ样品提取液清洗研钵。粗提酶液于４ ℃、８ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心１０ ｍｉｎ，取上清液，与等体积４０％（m/V）蔗糖溶液及１／５体积的溴酚蓝溶液混合，备用。 　　聚丙烯酰胺垂直板不连续凝胶电泳时，按分离胶７．５％（质量分数，下同）、浓缩胶４．０％［３］、每孔进样３０ μＬ进行，电泳电压浓缩胶１２０ Ｖ、分离胶１５０ Ｖ。 　　用醋酸联苯胺染色［９］。将胶板轻轻剥离，放入盛有ｐＨ值４．７的乙酸缓冲液的大培养皿中，除去浓缩胶，浸泡１０ ｍｉｎ。倒去乙酸缓冲液，加入配制好的染色液（使用前加体积分数３０％的Ｈ２Ｏ２ １～２滴），在室温下显色２０ ｍｉｎ。染色时轻轻摇动至出现酶带为止，之后倒去染色液，用去离子水漂洗若干次，至酶带呈棕色条带时止。 　　迁移率计算，ＰＯＤ同工酶迁移率＝酶带