柑橘黄龙病对赣南脐橙果园土壤生物学性质影响.docVIP

柑橘黄龙病对赣南脐橙果园土壤生物学性质影响 　　摘要：通过平板计数法、比色法、Biolog Eco微平板分析法测定柑橘黄龙病（citrus huanglongbing，HLB）不同染病级别脐橙的土壤微生物种群数量、土壤酶活性及土壤微生物功能多样性。结果表明，与健康的晚棱脐橙相比，在感染黄龙病前期其土壤生物学性质的变化不大；在感染的中后期，由于根系在营养缺乏和病害的双重影响下逐渐坏死，根系生态系统遭到破坏，晚棱脐橙土壤的微生物数量、土壤酶活性及土壤微生物功能多样性均明显下降。 　　关键词：柑橘黄龙病；赣南脐橙；土壤；酶活性；微生物数量；微生物功能多样性 　　中图分类号： S436.661.1+9 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2017）20-0162-03 　　柑橘黄龙病是柑橘生产具有毁灭性的一种病害，堪称柑橘的癌症，一旦发病大多采用根除果树的办法防治，对产业发展发展危害极大[1]。由于黄龙病病原（韧皮部杆菌）的不可培养性，目前对于柑橘黄龙病的防治尚无特效药剂，也没有抗（耐）病品种可供应用[2]。黄龙病由木虱传播侵染，病树主要表现为叶片斑驳型黄化、均匀型黄化、缺素型黄化和“红鼻子”果等症状[3-4]。一般认为，黄龙病病害症状的产生往往是其细胞、组织或器官受到某种破坏而变质所致，同时也是叶片内部矿质营养元素供给失衡的外显[5]。有研究表明，在黄龙病的典型症状――叶片斑驳黄化之前，根系就已经被病菌入侵，从而导致根系养分吸收与输送功能受损并逐步丧失正常功能，使得根际土壤微生物的生存环境发生变化，威胁柑橘植株根系土壤的生态稳定，不利于土壤微生物的活动与土壤生物活性的维持[6-7]。 　　土壤生物学的研究表明，作为土壤生态系统的重要组成部分，土壤微生物直接参与土壤营养物质的矿化过程，在维持整个土壤生态系统能量流动和物质循环中发挥着关键作用[8]。而土壤微生物多样性则是指土壤微生物及其与环境形成的生态复合体以及与此相关的各种生态过程的总和，是果园土壤生态系统的重要组成部分，它代表着土壤微生物群落的稳定性[9]。与土壤理化性质相比，土壤微生物对于果树根系环境的变化更为敏感，同时在其利用碳源的代谢过程中所产生的各种代谢产物与果树根系分泌物一起参与果树对土壤养分的吸收利用[10]。活跃的土壤微生物活动是自然状态下培肥土壤的重要途径，并对土壤酶活性的增加具有积极影响，有助于维持果园土壤生态系统的稳定以及果树对土壤营养元素的吸收利用，同时也可以评估植物根系病害的状况。 　　本研究以感染柑橘黄龙病的晚熟脐橙品种晚棱为研究对象，以健康植株为对照，研究黄龙病侵染对晚熟脐橙果园土壤微生物数量、土壤酶活性及土壤微生物功能多样性的影响，以探究赣南脐橙果园土壤生物学性质对黄龙病的响应。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　材料为5年生晚棱脐橙叶片及果园土壤，试验地位于江西省赣州市信丰县嘉定镇，地理坐标为25°22′26 N，115°2′48 E，属中亚热带季风湿润气候，日照充足，降雨较多，年均日气温19.2 ℃，年均降水量1 500 mm。于2016年12月，在果园中随机选取各病情级别的病树3株，从不同方向采集有症状的叶片带回实验室待测。土壤带回实验室后在自然状况下风干，过2 mm筛保存待测。 　　1.2 黄龙病的分级 　　根据文献报道及经验将存活的黄龙病侵染的病树依病情分为5级[11-12]。0级：全树无病；1级：树上有1～2个梢有斑驳黄化叶出现；2级：树上部分侧枝或主枝有斑驳黄化症状，症状枝占全树的1/3及以下；3级：症状侧枝或主枝占全树的1/3以上和2/3以下；4级：?Y状枝在2/3及以上。 　　1.3 分析方法 　　黄龙病的检测通过聚合酶链式反应（PCR）进行[3]；土壤微生物数量测定：细菌数量采用牛肉膏蛋白胨培养基平板混菌法培养测定；真菌数量采用孟加拉红培养基平板混菌法培养测定；放线菌数量采用高氏l号培养基平板混菌法培养测定[13]。土壤酶活性的测定：磷酸酶活性采用PNPP法测定[14]，脲酶活性采用苯酚钠比色法测定[14]，蔗糖酶活性采用水杨酸比色法测定[15-16]。 　　土壤微生物群落功能多样性采用Biolog Eco微平板分析法测定，取10 g新鲜土壤加入100 mL灭菌的0.9% NaCl水溶液中，200 r/min振荡10 min，将其稀释至1 000倍后接种（150 μL），25 ℃下恒温培养7 d，每隔24 h用多功能酶标仪在590 nm波长下读数，计算获得平均颜色变化率（average well colourdevelopment，AWCD）[17]。 　　1.4 数据统计分析 　　试验测定数据采用Excel 2007进行整理，SigmaPlot 100作图，采用SAS 8.0统