（毕业设计论文）《漆酶G033酶学性质的研究》.doc

PAGE 毕 业 设 计（论 文）任 务 书 课题名称 漆酶G033酶学性质的研究 姓 名 学 号 院 系 化学与环境工程学院 专 业 生物工程 指导教师 年10月15日 一、设计（论文）的教学目的 1、了解本课题研究领域国内外的最新科研动态，通过文献资料的查阅，文献综述的撰写，实验方案的确定等，提高分析问题和解决问题的能力； 2、培养认真细致的科学研究精神和严谨踏实的实验研究态度，通过扎实的实验研究，提升实验动手能力，掌握科学研究的基本方法，并学会规范地撰写科研论文； 3、培养运用理论知识解决实际问题的能力，并通过理论与实践相结合，巩固专业知识，使所学知识在实验研究中得到拓展与升华。 设计（论文）的主要内容 漆酶G033酶学性质的研究 （湖南城市学院生物工程专业2012届学生） 摘 要：通过研究漆酶在不同的ph，温度下漆酶的酶学活性探求漆酶的最佳ph，最佳温度。漆酶在不同ph，温度保存一定的时间测得其酶学活性而得到酶稳定性。在最佳温度，ph下保存不同的时间可以知道漆酶关于时间的稳定性，在不同的缓冲液中实验可以得知缓冲液对漆酶的影响。 关键词：漆酶，酶学性质，紫外分光光度计 1.绪论 　漆酶是一种多酚氧化酶,实际上具有广泛氧化性能,催化氧化酚类、苯胺类化合物,在造纸、食品、皮革等工业领域有广泛的应用前景。担子菌中的白腐菌是漆酶最重要的生产者,也是目前自然界中已知的能完全降解木素的唯一生物,其分泌的胞外酶之间以及胞外酶和小分子物质之间存在着广泛而复杂的协同作用。在木质纤维素降解过程中,过氧化物酶(包括木素过氧化物酶和依赖锰过氧化物酶）需要过氧化氢(H2O2)才能降 解木素,漆酶降解木素则需要氧分子和酚型化合物等小分子(称为介体)参与。通常很少关注漆酶与过氧化氢之间的作用,然而当漆酶氧化木素形成苯氧自由基和醌,在醌类物质的氧化还原循环中也会涉及到H2O2的产生,H2O2在漆酶降解木素的过程中可能与降解木素的初始速率有关。实际上, Farver等人在1970年研究了漆酶与H2O2之间的反应,发现漆酶与H2O2之间有一种特殊作用,二者会生成一种稳定的具有高亲合力的复合物,该复合物不会被氧再氧化,其反应式可表示为: L-Cu(Ⅱ)+H2O2k1L-Cu(Ⅱ)·H2O2 1991年吴鼎泉等人用微量热法研究了漆酶和H2O2反应的一些热动力学性质,他们认为在无氧条件下漆酶能被氢醌还原,生成氢醌-酶中间复 合物,而后中间复合物转变为半醌和带一价铜的漆酶L-Cu(Ⅰ),用H2O2可代替O2氧化带一价铜的漆酶,转换成为原来带二价铜的漆酶,反应方程如 下: 有关H2O2和漆酶协同作用的研究尚未见报道。本论文研究了微量H2O2对漆酶催化底物ABTS反应的影响,为后漆酶/H2O2体系催化反应动力学研究提理论依据。 2.实验部分 2.1 实验材料 漆酶：由指导老师提供的纯酶，因其活力太高，将其稀释1000被作为原酶为实验原材料。 2′-连氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(英文简写成ABTS)购自Sigma公司 纯的双氧水，将其稀释浓度为2mmol/L供实验用 配置醋酸-醋酸钾缓冲液，柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液 2.2 实验器材 紫外可见光分光光度计（ ） 恒温箱（ ） 冰箱（ ） 3 实验部分 本实验主要从以下几个方面来探究温度，ph，缓冲剂对酶活性的影响，从而在实验的基础得到理论指导。(先测得原酶的酶活作为参照） 1 原酶的活性 稀释1000倍后测其酶活性 2 温度对酶活性的影响 在20 30 40 50 60 70 80 90摄氏度下酶保存30min 测得其酶活，得到温度-酶活曲线 3 ph对温度的影响 在ph为2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 9.0 9.5测得其酶活得到ph-酶活曲线 4 温度对酶稳定性影响 在从20摄氏度开始，以10摄氏度没梯度保存150min测得其酶活，计算比酶活力，得到温度-比酶活力曲线 5 ph对酶稳定性的影响 在ph为2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 9.0 9.5下保存24h，测得其酶活力，计算比酶活力得到ph-比酶活力的曲线 6 时间对最佳温度的酶稳定性的影响 保存0.5h 1