转基因玉米pNK603质粒分子的构建与应用.pdfVIP

农业生物技术学报，2011年，第19卷，第3期，第565～570页 Journal 1 ofAgriculturalBiotechnology，201，V01．19，No．3，565-570 研究资源 Resources 转基因玉米pNK603质粒分子的构建与应用 董莲华-．李亮1王晶- 中国计量科学研究院，北京100013 +通讯作者，lianhuadong@gmail．conl 摘要随着转基因植物和相关产品的迅速发展，转基因检测相关标准物质的需求越趋紧迫，本文针对转基 因玉米(Zea 料中定性扩增转化体特异性片段(NK603—108 bp)和玉米的内标基因片段(zSSHb．151bp)，将得到的PCR产物 酶切连接后构建到T载体上，经过酶切、PCR扩增和测序三重验证，得到了pNK603质粒分子。选用不同转基 因作物的转化体特异性引物和内标准基因引物对构建的pNK603质粒分子的特异性进行检测，PCR结果显 示除了特异性目的条带外，并未发现非特异性扩增。同时采用pNK603质粒分子和转基因玉米阳性基因组 DNA作定量标准对已知含量的3个水平的转基因基体物质进行转基因含量测定，实时荧光定量PCR结果发 现，两种标准所得到测定的数据没有达到统计学差异显著。丁检验表明，PCR扩增效率、两种标准所产生的内 源或外源基因的标准曲线的斜率和截距没有显著性差异。这些结果表明，pNK603质粒分子可以作为转基因 玉米NK603转化体特异性的定性和定量检测用标准物质。 关键词转基因玉米，NK603，质粒分子，标准物质，基体 PlasmidConstructionand ofGeneticModifiedMaizeLine 傩603 Application Lianhual’Li Dong WangJin91 Lian91 NationalInstitute ofMetrology，Beijing100013，China ‘Correspondingauthor,lianhnadong@gmail．corn 1．03．024 IX)I：10．3969／j．issn．1674-7968．201 AbstractWiththe of modifiedand needisthestandard developmentgenetic plantsproducts，theurgent referencematerialsfor modifieddetection．Thisworkisabout modifiedmaizeNK603standard genetic genetic constructionand NK603event plasmid application．Geneticmodified(GM)maize(Zeamays)line specificproduct and zssllb were and toTvectortoconstructed endogenousgene productamplifiedligated plasmidpNK603．And the was byPCR and showed pNK603plasmidsuccessfullyproofed amplification，digestionsequencing．Results thatthe Was forGMmaizeNK603sincetherewereno otherPCR pNK603plasmidveryspecific any product the main