淫羊藿苷元磷脂复合物防治去卵巢骨质疏松大鼠骨丢失和提高骨质量实验研究.docVIP

淫羊藿苷元磷脂复合物防治去卵巢骨质疏松大鼠骨丢失和提高骨质量实验研究 　　[摘要] 目的： 探讨淫羊藿苷元磷脂复合物防治去卵巢骨质疏松大鼠骨丢失和提高骨质量的作用。方法： 72只雌性大鼠，随机分为6组：假手术组、模型组、雌二醇组和淫羊藿苷元磷脂复合物低、中、高剂量组。假手术组仅行假手术，其余5组行卵巢切除术。术后1周分别灌胃给予17β-雌二醇（2 mg·kg-1）和淫羊藿苷元磷脂复合物低、中、高剂量（15，30，60 mg·kg-1），连续给药3个月。测定血钙、血磷和碱性磷酸酶（ALP），尿钙（u-Ca）、尿磷（u-P）、尿脱氧吡啶酚（D-Pyr）和肌酐（Cr）。之后处死动物，取出股骨、腰椎和胫骨，分别测定股骨密度，骨钙、骨磷，腰椎生物力学性能，胫骨组织形态计量学参数。结果： 与假手术组相比，模型组血清ALP，u-Ca，D-Pyr/Cr显著增加，子宫萎缩，股骨密度、骨钙、骨磷、腰椎生物力学参数（弹性载荷、最大载荷、断裂载荷、刚度）、胫骨上段静态参数（骨组织总面积、骨小梁面积、骨小梁周长）、动态参数（标记周长百分数、骨形成率）均降低。与模型组比较，淫羊藿苷元磷脂复合物中、高剂量和雌二醇组可使血清ALP，u-Ca，D-Pyr/Cr排出量降低，股骨密度、骨钙、骨磷、腰椎生物力学参数（弹性载荷、最大载荷、断裂载荷、刚度）、胫骨上段静态参数（骨组织总面积、骨小梁面积、骨小梁周长）、动态参数（标记周长百分数、骨形成率）均增加。雌二醇组大鼠子宫增生，淫羊藿苷元磷脂复合物组大鼠子宫没有增生性变化。结论： 淫羊藿苷元磷脂复合物能抑制由于去卵巢雌激素缺乏引发的骨转换增强，提高骨密度，增强腰椎抗压生物力学性能，且长期服用对子宫没有刺激作用。 　　[关键词] 淫羊藿苷元；磷脂复合物；骨质疏松；骨密度；骨组织形态计量学；生物力学 　　淫羊藿为小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornu Maxim.的干燥叶，具有补肾壮阳，祛风除湿的功效。研究提示，由淫羊藿组成的补肾复方在抑制骨量丢失，改善骨密度，增强生物力学抗压性能方面有明显疗效[1]。淫羊藿的主要成分淫羊藿苷（icariin）等黄酮类能促进成骨细胞增殖分化[2]，促进去卵巢大鼠骨和下丘脑不同核团ERβ mRNA表达[3]。淫羊藿苷元（anhydroicaritin）为淫羊藿的一种多羟基黄酮类单体成分，抗骨质疏松作用较淫羊藿中其他黄酮类化合物强[4]，但其水溶性差， 生物利用度低，制约了其药效的发挥。Bombardelli等[5]发现，天然黄酮类化合物对磷脂有特殊的亲和力，二者结合形成磷脂复合物（phytosomes 或phospholipid complex），其理化性质较原母体化合物有不同程度的改变，通过与磷脂复合而形成载体系统或前体药物，可改善药物经胃肠道吸收， 获得较高的血药浓度， 且药物在体内消除变慢，生物利用度显著提高。为验证工艺的可行性，本研究运用去卵巢大鼠造成骨质疏松模型，比较不同剂量的淫羊藿苷元磷脂复合物（anhydroicaritin phytosomes，AIP）和雌二醇防治去卵巢骨质疏松大鼠骨丢失和骨质量下降的作用机制。 　　1 材料 　　1.1 动物 3 月龄SPF级雌性SD大鼠共72只，体重（267±16） g，实验动物由河北省实验动物中心提供，许可证号SCXK（冀）2003-1-003。 　　1.2 仪器与试剂 慢速锯（美国 Buehler 公司），硬组织切片机及钨钢刀（德国 Leica 公司），NGS-10KNG 电子万能精密材料试验机（日本岛津公司），自动化图像数字化分析仪包括光镜和荧光显微镜（日本Nikon公司），AE100电子天平（中国伯乐公司），火焰原子吸收分光光度计（日本岛津公司），Lunar-XR 型双能X线骨密度测定仪（美国Lunar公司），ALCYON 300i型全自动生化仪（美国 Abbott Laboratories公司），D-800 LS智能药物溶出仪（天津大学无线电公司），大鼠代谢笼（意大利 TECN IPLAST 公司）。盐酸四环素及钙黄绿素（美国 Sigma 公司），17β-雌二醇（17β-E2，Sigma 公司），钙、磷试剂盒、肌酐试剂盒、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）检测试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司产品），脱氧吡啶酚ELISA试剂盒（美国Quidel Corporation公司）。淫羊藿苷元（自制，质量分数98%），大豆磷脂（江苏曼氏生物科技有限公司）。 　　1.3 淫羊藿苷元磷脂复合物（AIP）的制备工艺[6] 称取淫羊藿苷元（anhydroicaritin，C21H20O6）500 mg及一定量的大豆磷脂， 加适量的无水乙醇溶解，于一定的温度下搅拌回流一定时间，减压回