淮山多糖超声辅助提取及清除こ氧阴离子自由基作用.docVIP

淮山多糖超声辅助提取及清除こ氧阴离子自由基作用 　　摘要：以无水乙醇为提取剂，采用超声辅助提取淮山中的多糖，设计L9（34）正交试验，研究超声功率、液料比、提取时间、提取温度对淮山多糖提取率的影响，并通过分光光度法分析淮山多糖清除超氧阴离子自由基能力。结果表明，淮山多糖的最佳提取工艺为超声功率800 W、液料比80 mL ∶[KG-*3]1 g、提取时间50 min、提取温度60 ℃，在此条件下淮山多糖提取率高达 8.53%。结果还表明，淮山多糖具有较好的清除超氧阴离子自由基的能力，且其清除能力与多糖浓度有明显的量效关系。 　　关键词：淮山；多糖；超声辅助提取；清除；超氧阴离子自由基 　　中图分类号： TS201.2文献标志码： A 　　文章编号：1002-1302（2017）04-0144-03 　　淮山别称山药、怀山药，含有淀粉、多糖、尿囊素、胆碱等成分，药用价值极高，是药食两用的食品[1]。近年来，淮山多糖已被确定具有抗氧化功能[2]，有提高人体免疫功能和抗病能力[3]。超氧阴离子自由基（O-2[KG-*2]? [KG-*3]）是活性氧之一，具有强烈的氧化能力[4]。O-2[KG-*2]? [KG-*3]产生异常会损坏细胞，直接或间接导致机体衰老、炎症和癌症等某些疾病，因此对O-2[KG-*2]? [KG-*3]清除的研究在医学保健中越来越重要[5]。 　　在淮山多糖提取方法中，最常见的有水提取法[6-7]、微波法[8-9]、酶解超声辅助提取法[10]。用水提取山药多糖成本低，不破坏生物活性，方便实用且安全性高，但耗时长、提取率不高。利用微波提取山药多糖具有高效快速的优点，但微波功率较难控制。酶与超声提取法使用的酶作为一种蛋白质，其酶解效果受酶解温度、pH值、底物浓度等多种因素影响，对提取会有干扰。超声波提取法主要利用超声波的空化作用产生热效应，机械作用加速细胞壁的破碎，促进细胞内多糖的溶出，达到缩短提取时间和提高多糖提取率的目的，还具有无需加热的优点。 　　本试验采用超声辅助提取淮山多糖，研究淮山多糖的最佳提取工艺。此外，通过分光光度法研究淮山多糖对超氧阴离子自由基的清除作用，分析其体外抗氧化活性，旨在为淮山的深度加工和综合开发利用提供一些参考依据。 　　1材料?c方法 　　1.1材料、试剂与仪器 　　淮山购自贺州市阳光市场。所用化学试剂均为分析纯，试验用水为蒸馏水。可见分光光度计为722型（上海光谱仪器有限公司）。 　　1.2方法 　　1.2.1淮山多糖的超声辅助提取 　　将新鲜淮山洗净、去皮切片，60 ℃烘干后粉碎。称取干燥淮山粉末2.00 g，按设定试验条件进行超声波提取、离心，将上清液浓缩至15 mL，再加入60 mL乙醇，在冰箱冷藏室中放置24 h，离心，取沉淀，用乙[LM]醇洗涤后，再用蒸馏水溶解、稀释到合适的浓度，测定吸光度，按下式计算淮山多糖的提取率： 　　[JZ]提取率=C×V/m×100%。 　　式中：C为淮山多糖浓度，mg/mL；V为淮山多糖提取液的体积，mL；m为淮山粉末质量，mg。 　　1.2.2最优提取工艺条件的确定 　　在单因素试验的基础上，以超声功率、液料比、提取时间和提取温度为影响因素，以淮山多糖的提取率为指标，设计L9（34）的正交试验（表1）确定最优提取工艺。首先，分别称取5份2.00 g淮山粉末，固定液料比为60 mL ∶[KG-*3]1 g，超声时间为30 min，超声温度为60 ℃，分别研究400、600、800、1 000、1 200 W超声功率对淮山多糖提取率的影响。其次，在确定最佳超声波功率后，分别称取5份 2.00 g 淮山粉末，超声时间为30 min，固定超声功率为 800 W，超声温度为60 ℃，研究40 mL ∶[KG-*3]1 g、60 mL ∶[KG-*3]1 g、80 mL ∶[KG-*3]1 g、100 mL ∶[KG-*3]1 g、120 mL ∶[KG-*3]1 g的液料比对淮山多糖提取率的影响。在确定最佳超声波功率、液料比后，称取5份2.00 g淮山粉末，固定超声功率为800 W，液料比为80 mL ∶[KG-*3]1 g，超声温度为60 ℃，研究30、40、50、60、70 min提取时间对淮山多糖提取率的影响。在确定最佳超声波功率、液料比、提取时间后，分别称取5份 2.00 g 淮山粉末，固定超声功率为800 W，液料比为80 mL ∶[KG-*3]1 g，提取时间为50 min，研究40、50、60、70、80 ℃提取温度对淮山多糖提取率的影响。 　　1.2.3多糖含量的测定 　　称取0.100 0 g无水葡萄糖于烧杯中溶解，转移至100 mL容量瓶内，加水至刻度处，得 1.00 mg/mL 葡萄糖溶液