溃疡性结肠炎组织中NF―κB p65 和SIGIRR表达及意义.docVIP

溃疡性结肠炎组织中NF―κB p65 和SIGIRR表达及意义 　　摘要：目的：检测SIGIRR、NF-κB p65 在UC患者结肠黏膜的表达，探讨其在UC发病机制中的作用及相互关系。方法：采用免疫组化SP法检测32例UC内镜活检标本和16例正常对照组织中SIGIRR、NF-κB p65的表达情况。结果： UC 组织NF-κB p65蛋白表达高于正常对照（P0.01）；SIGIRR在UC组织表达低于正常对照（P0.05）。NF-κB p65表达与病理分级正相关，SIGIRR 表达与病理分级负相关，NF-κB p65和SIGIRR的表达呈显著负相关（P0.05）。结论：SIGIRR可能通过作用于NF-κB p65信号通路影响UC炎症的发生发展。 　　关键词：溃疡性结肠炎；核转录因子KappaB；免疫球蛋白单体IL-1受体相关分子（SIGIRR） 　　溃疡性结肠炎（UC）的病因和发病机制尚不清楚，目前认为可能是肠道细菌及其代谢产物作用于基因易感性宿主使之产生异常的免疫反应所致，核因子κB（NF-κB p65）是UC发病过程中最重要的调控因子[1]，可促进多种炎性细胞因子的转录[2]，因此，NF-κB p65信号通路的活化必须受到严密的控制。SIGIRR（Translation initiation region 8）是新近发现的负性调节因子，但是在UC组织中二者关系如何未见报道。因此，我们检测NF-κB p65和SIGIRR在UC 结肠黏膜的表达和分布， 探讨他们在UC 发病机制中的作用及相互关系。 　　1 .资料与方法 　　1.1 研究对象 　　1、溃疡性结肠炎组 纳入标准：我院UC的患者32例，男21例，女10例，平均年龄：36.78（20～70）岁。UC的诊断标准为2000年全国炎症性肠病学术会议（成都）的制定的诊断标准[2]，病理分级根据Truelove-Richards标准[3]，分为Ⅰ～Ⅲ级，其中Ⅰ级10例、Ⅱ级11例、Ⅲ级12例。 　　2、对照组 纳入标准：结肠镜检查肠黏膜正常或为单发性结肠息肉患者16例，男9例，女8例，平均年龄：38.17（20～69）岁。 　　1.2 试剂： 　　兔抗人NF-κBP65单克隆抗体（Santa Crutz公司），兔抗人SIGIRR多克隆抗体（ABCAM公司），SP-9003免疫组化试剂盒（ZYMED公司），聚合酶辅助剂和辣根酶标记的二抗（北京中杉金桥生物制品公司） 　　1.3 检测方法 　　内镜下取材UC患者经结肠镜钳取病变最显著肠黏膜组织4块，对照组取直肠黏膜或肠镜下选择距单发性息肉5CM以上的肠段黏膜组织4块，并经病理学确认为正常的结肠黏膜组织。肠黏膜经10%甲醛固定后，常规石蜡包埋，4um连续切片。采用SP免疫组化法染色。结果判断以细胞膜或胞浆染呈黄色至棕褐色为阳性细胞，无着色为阴性。分别观察细胞染色强度及阳性细胞百分数。采用定量积分法[5]。 　　1.4 统计学处理 　　所有资料为等级资料，多组之间比较采用H检验（Kruskal-Wallis法）；组与组间的比较采用秩和检验；各指标之间的相关性用Spearman等级相关分析。用SPSS18.0统计软件分析。 　　2. 结果 　　2.1 NF-κB p65表达与溃疡性结肠炎及其严重程度的关系 　　免疫组化染色显示NF-κB p65在正常对照组肠黏膜上皮和固有层只有极少的弱阳性表达。但在UC组肠黏膜表面上皮、隐窝上皮细胞、固有层单个核细胞都有NF-κB p65的高表达，以胞核表达为主。 　　NF-κB p65在溃疡性结肠炎患者肠黏膜中的表达为30/32（93.7%）显著高于和正常对照者7/16（43.7%）（P0.001），并且随着病变严重程度加重而增高（表2.1）。 　　表2.1 对照组及不同严重程度溃疡性结肠炎患者肠黏膜内NF-κB p65的阳性积分比较 　　注：a为P0.001 vs 对照组；b为P0.05 vs UCⅠ级组 　　2.2SIGIRR表达与溃疡性结肠炎及其严重程度的关系 　　免疫组化染色显示SIGIRR在正常对照组肠黏膜上皮和固有层均有中等量表达，但在UC组肠黏膜表面上皮、隐窝上皮细胞、固有层单个核细胞均为不表达或弱阳性表达 　　SIGIRR在溃疡性结肠炎患者肠黏膜中的表达为20/32（62.5%）显著低于正常对照者15/16（93.7%） （P0.05），并且随着病变严重程度加重而减少（表2.2）。 　　表2.2 对照组及不同严重程度溃疡性结肠炎患者肠黏膜内SIGIRR的阳性积分比较 　　注：a为P0.001 vs 对照组；b为P0.05 vs UCⅠ级组 　　2.4溃疡性结肠炎患者肠黏膜中SIGIRR和NF-κB p65表达间的相互关系 　　经Spea