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玉米育种中分子标记研究进展与应用 　　摘要 分子标记技术的开发利用使玉米育种家有可能直接根据基因型而不是表现型进行选择，在玉米育种工作中起着越来越重要的作用。综述了玉米育种中主要的分子标记和近年来分子标记技术在玉米遗传图谱构建、目标基因的标记与定位、遗传多样性研究、品种真实性鉴定、杂种优势预测以及分子标记辅助选择中的应用。 　　关键词 玉米育种；分子标记；应用 　　中图分类号 S513.035.3文献标识码A文章编号1007-5739（2008）18-0168-02 　　 　　分子标记是20世纪80年代随着分子生物学的发展开发的一类以DNA多态性为基础的遗传标记，它能够反映植物在遗传物质DNA水平下产量差异，是生物遗传物质变化的外在反映，信息量极为丰富，而且不受外部环境的影响[1]。在植物的不同发育阶段、不同环境条件下、不同组织中都可以进行检测，使得对基因型的早期选择成为可能，而且在后代中表现显性、共显性遗传。不仅有利于对隐性基因控制的农艺性状进行选择，而且可以利用与目标基因紧密连锁的分子标记对育种后代材料进行相关选择，提高选择的准确性，缩短育种年限，减少工作量，提高育种效率。分子标记技术的迅猛发展，促进了玉米育种研究各个领域的发展。 　　 　　1玉米育种中的主要分子标记 　　 　　1.1RFLP 　　RFLP即限制性片段多态性。其基本原理是检测DNA在限制性内切酶酶切后形成的特定DNA片段的大小，包括基因组DNA限制性酶切、电泳分离、southern转移、特异性探针杂交检测等步骤。 　　1.2RAPD 　　RAPD即随机扩增多态性，是由Williams（1990）和Welsh（1990）领导的2个研究小组同时发现的一种新的DNA分子标记。它是以PCR为基础，利用人工合成的随机序列寡核苷酸作引物，以生物的基因组DNA作为模板进行PCR扩增反应，产生不连续的DNA产物，通过琼脂糖凝胶电泳来检测DNA序列的多态性。 　　1.3AFLP 　　AFLP即扩增的酶切片断长度多态性，是由Zebeau等（1993）发明的利用PCR检测DNA多态性的一项技术。其基本原理是基因组DNA用限制性内切酶消化产生大小不等的DNA片段，经添加接头和PCR选择扩增、电泳形成丰富DNA标记。AFLP标记结合了RFLP和RAPD的优点，具有多态性丰富、所需DNA量少、结果稳定可靠、重复性好等特点。 　　1.4SSR 　　SSR又称为简单重复序列，是由1～9个bp对为重复单位组成的高度重复序列。在染色体上呈随机分布。由于重复次数和重复程度不同，造成了每个基因位点的多态性。可以根据重复单元两端存在的保守序列设计引物，经PCR扩增、电泳等技术进行检测。 　　 　　2分子标记在玉米育种中的研究进展与应用 　　 　　2.1DNA指纹图谱建立、品种鉴定及种子纯度检测 　　作物性状大多属数量性状，由多基因控制，易受环境影响，分子标记可以用来建立DNA指纹库，利用DNA指纹图谱可以进行玉米自交系及杂交种的分类与鉴定。根据种质资源DNA指纹的多态性，可以对育种材料的变异丰富做出评价。在杂交育种中，可以选择到各个目标性状互补程度最大的亲本，以便在后代中有可能选择到综合性状最优的单株。另外通过建立主要玉米自交系和主要推广杂交种的指纹图谱，可以很有效地鉴定品种纯度，对种子质量进行监测。赵久然等[2]利用5个玉米单交种子粒的果皮，以160对SSR引物进行SSR分析，表明果皮中的DNA具有与杂交种母本完全相同的DNA指纹，可通过杂交种获得其母本的全套DNA及其指纹图谱。李晓晖等[3]以21份玉米骨干自交系组配的13个杂交种为材料进行SSR分析，结果表明，应用2～3个引物组合构建的SSR图谱通过统计测验就可以将13个杂交种完全区分，SSR技术结合单子粒DNA快速提取的方法可以快速、准确地鉴定玉米杂交种纯度[3]。 　　2.2总标记与杂种优势预测 　　利用分子标记研究亲本遗传差异与杂种优势的相关性首先是在玉米中展开的，分子标记遗传距离与杂种产量及杂种优势表现之间存在的相关性为预测杂种优势提供了新方法。Smith等[4]发现，亲本间RFLP的遗传距离和杂种优势有着显著的正相关性；Godshalk[5]等则观测到亲本间RFLP的遗传距离和F1杂种产量及杂种优势间的相关性很低。Melchinger等[6]指出，在同一杂种优势组内亲本间RFLP的遗传距离和F1表现的相关性高；亲本来源于不同的杂种优势组时，相关性低。吴敏生等[7，8]研究了17个玉米自交系的AFLP分子标记与相应136个单交种的产量、产量杂种优势的关系，结果发现：基于AFLP数据计算的遗传距离与杂种产量、产量杂种优势的相关性均达到显著水平，但决定系数（r2）都很小；当亲本材料改变时，它