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甜瓜同源四倍体创制及其初步定性研究 　　摘要：通过未成熟胚子叶的组织培养创造体细胞无性系变异，诱导出了齐甜1号的同源四倍体甜瓜，激素质量浓度以BA3.0mg/L为佳，加倍率为14.3％。对再生的同源四倍体及二倍体甜瓜植株进行了茎、叶、花、果实、种子的形态观察，及各项形态指标和主要品质指标的测定。结果表明：除果形指数变小外，四倍体植株的茎、叶、花、果实、种子各项形态指标的值均显著大于二倍体。同时，四倍体甜瓜维生素C、可溶性糖含量也显著高于二倍体。 　　关键词：甜瓜；未成熟胚子叶；同源四倍体；形态；品质 　　 　　同源多倍体是遗传和育种研究的重要材料。多倍体的“巨型性”及次生代谢产物增加和抗逆性增强的特性可被用来改善植物农艺性状、增加产量、改善品质。多倍体育种可创造新的种质资源，扩大种质资源的利用范围，通过多倍体诱变、远缘杂交等使野生种与栽培种的优良性状相结合，产生并固定杂种优势。 　　在植物多倍体诱导中，利用组织培养过程中的无性系体细胞变异出现自然加倍获得四倍体再生植株具有成功率高、可一定程度避免嵌合体的产生及条件易调控等优点。本文通过未成熟子叶培养过程筛选鉴定同源四倍体甜瓜，建立同源四倍体诱导体系，并且对获得的同源四倍体甜瓜进行了形态观察和品质测定，为甜瓜多倍体育种实践打下了一定的基础。 　　 　　1　材料与方法 　　 　　1.1 材料 　　供试材料为早皇后、9904、4810、黄金瓜、齐甜1号、新青玉，其中早皇后是地方常规品种，4810为多抗源复合杂交后的低代自交系，其余4个为杂交F，代品种。试验于2006年在南京农业大学进行。 　　1.2 方法 　　1.2.1　未成熟子叶培养 从田间摘取发育18～23d的未成熟果实，经流水冲洗果面后在超净工作台上用75％的酒精进行表面消毒。然后剖开果实，取出尚未发育成熟的种子。去掉种皮并切取近胚轴端子叶中部组织作为外植体，接种在诱导无性系变异培养基上。诱导培养基共4种，分别为：MS+BA 1.0mg/L；MS+BA 2.0 mg/L；MS+BA 3.0 mg/L；MS+BA 4.0mg/L。每个处理接种约20个外植体，置于弱散射光条件下诱导培养。培养至叶面或叶缘产生芽丛后，将芽丛及时切下，转移到生长培养基(MS+BA 0.2 mg/ L)上，以促进芽伸长。 　　除特别说明外，所有培养基均为固体培养基，附加3％蔗糖，0.8％琼脂，pH值5.8左右。培养条件：温度(25±2)℃，每日光照16 h，光照度2 000 lx左右。 　　 　　1.2.2 倍性鉴定 将驯化后的植株移栽于南京农业大学蔬菜试验基地。植株长出2-3片真叶后，取长0.5～1.0 cm的细嫩卷须，参照陈劲枫等的方法进行有丝分裂染色体制片，以确定植株染色体数目，统计处理芽数、愈伤组织数、出芽数、变异芽数和加倍芽数，计算出愈率(愈伤组织数/处理芽数)、出芽率(出芽数/处理芽数)、变异率(染色体数目发生变异的株数/处理芽数)和加倍率(加倍株数/处理芽数)。 　　1.2.3 形态性状观察 甜瓜进入盛花期，测量植株第3、5、7、9节的节间长、茎粗、叶长、叶宽、叶柄长、叶柄粗等形态指标；每株分别取5朵当天开放的雌、雄花，测量花萼长、花?k长和花?k宽。授粉20d后测果实纵径、果实横径、单果质量并计算果形指数(果实纵径/果实横径)。果实成熟期，采摘四倍体再生植株及二倍体植株果实5个，每个单瓜随机选择20粒种子进行观察、测量。 　　 　　1.2.4 维生素C及可溶性糖含量的测定 参照李合生的方法，从田间摘取发育正常的甜瓜果实，洗净、擦干，用不锈钢刀取果肉2g，磨碎后用比色法测定维生素C含量。同时，采用蒽酮比色法测定叶片可溶性糖含量。均重复3次，数据采用SPSS软件进行LSD测验。 　　 　　2　结果与分析 　　 　　2.1 未成熟胚子叶经诱导后组织再生情况 　　白色的未成熟胚子叶外植体(图版1 A)接种在诱导培养基上2～5 d后急速膨大变绿(图版1B)，切口边缘形成少量愈伤组织，10～15 d后子叶边缘或表面开始分化出芽丛(图版1C)或形成愈伤组织块(图版1D)。出芽部位多集中在外植体近下胚轴一端切口边缘与维管束交接处，另一端则较少，30d左右芽长达1～2 cm。将芽丛切下转移至伸长培养基中培养(图版1 E)，离体条件下发生变异的小植株已经可以看出其叶片与普通二倍体的不同(图版1 F)。将所有植株生根后进行驯化。 　　 　　2.2 不同质量浓度的激素对甜瓜未成熟胚子叶再生及加倍的影响 　　试验共设4个不同BA质量浓度诱导甜瓜无性系变异的发生。表1结果显示，BA较高的培养基出愈率也较高，出芽率则相对较低；相反，BA较低的培养基出愈率较低，出芽率则较高。观察得到，BA质量浓度较高的培养基相对于较