磁处理对菊花组培苗增殖及生理生化影响.docVIP

磁处理对菊花组培苗增殖及生理生化影响 　　摘要：以切花菊品种优香组培苗为试验材料，用4种磁感应强度（6、12、18、24mT）和4种磁处理时间（2.5、5、10、20h）的组合进行磁处理，测定磁处理后组培苗的繁殖系数、可溶性糖含量、相对电导率以及POD、SOD、CAT活性等指标。结果发现，12mT/10h处理下组培苗繁殖系数最高，12mT/5h处理下组培苗可溶性糖含量最高，18mT/20h处理下组培苗相对电导率最低，24mT/2.5h处理下组培苗CAT活性最低，18mT/10h处理下SOD活性最低，12mT/2.5h处理下POD活性最低。以上结果表明，磁处理对菊花组培苗繁殖系数及生理生化具有不同程度的影响，这为今后将磁处理应用在菊花乃至其他观赏植物组织培养方面提供理论的参考。 　　关键词：菊花；组培苗；磁处理；增殖；生理生化 　　中图分类号：S682.1+10.4+3文献标志码：A文章编号：1002-1302（2014）11-0080-03 　　生物磁学是近几十年发展起来的一门研究磁性、磁场与生物特性和生命活动之间相互联系及相互影响的边缘学科，目前已在医疗、工业、农业和环保等方面得到广泛的应用[1]。植物组织培养几乎涉及植物生物技术的所有内容，广泛应用于细胞、分子生物学等研究领域[2]。然而，生物磁学在植物组织培养中的应用相对较少，到目前为止仅有磁处理黄精[3]、菊花[4]、乌药[5]、滨梅[6]等组培苗以及拟南芥[7]、变叶木[8]、马尾松[9]等愈伤组织的报道，已有结果均表明合适的磁处理对植物组培苗或愈伤组织的生长有促进作用。但这些报道多数只局限于磁处理对组培苗或愈伤组织外部形态的影响，而尚未涉及到内部生理生化的影响。本试验以切花菊品种优香（Chrysanthemummorifolium）为材料，用4种磁感应强度（6、12、18、24mT）和4种磁处理时间（2.5、5、10、20h）的组合进行磁处理，探讨磁处理对菊花组培苗增殖及生理生化的影响，为磁处理在菊花组织培养方面的应用提供理论依据。 　　1材料与方法 　　1.1材料与试剂 　　切花菊优香原始组培苗由张家港骏马农林科技有限公司提供，在常熟理工学院生物与食品工程学院植物生物技术实验室扩繁。试验所用的试剂均为分析纯，CAT、SOD、POD试剂盒均购自南京建成科技有限公司。 　　1.2组培方法 　　选择生长健壮且一致的组培苗，在超净工作台中剪取长0.5cm左右带1个节的茎段，剪掉叶片，留一点叶柄以免损伤叶腋，形态学上端朝上垂直插入分化培养基MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+30g/L蔗糖+8g/L琼脂中，每瓶接种4～5个茎段。接种完后先在光照培养箱中培养3d，选取无污染的组培苗进行磁处理。培养温度为25±2℃，日光灯光源，光照度为21～24μmol/（m2?s），光照周期为12h/d[10]。 　　1.3磁处理方法 　　将无污染的菊花组培苗的培养瓶放在4种磁感应强度A（6mT）、B（12mT）、C（18mT）、D（24mT）的磁处理装置上进行磁处理，设置处理时间为1（2.5h）、2（5h）、3（10h）、4（20h），采用完全随机区组试验设计，共得到16个磁处理组合，无磁处理为对照组CK。每组处理为3瓶，重复3次。处理后均放在光照培养箱中培养，条件同“1、2”节，42d后统计测定各项指标[3-5]。 　　1.4指标测定方法 　　1.4.1繁殖系数统计统计0.5cm以上的生长正常的不定芽个数（不包括玻璃化芽），再计算繁殖系数：繁殖系数=分化出的不定芽个数/分化出不定芽的外植体个数[10]。 　　1.4.2相对电导率测定用电导仪测定。称取0.3g不定芽，剪碎后置于试管中，加入15mL蒸馏水浸提2h，摇匀，用电导仪测定电导率R1，沸水浴15min，静止冷却至室温，测电导率R2，最后计算相对电导率：相对电导率=初电导率/终电导率×100%[11-12]。 　　1.4.3可溶性糖含量测定 　　用蒽酮法测定[13]。精确称取0.1g不定芽，剪碎后置于试管中，加入5mL蒸馏水，加盖沸水浴30min，提取液过滤入50mL容量瓶中定容备用。每个样品取1mL加等体积蒸馏水、0.5mL蒽酮乙酸乙酯与5mL浓硫酸于试管中，充分混匀，1min后水浴冷却，用紫外-可见分光光度计测630nm处的吸光度D630nm，参照蔗糖标准曲线计算可溶性糖含量，蔗糖标准曲线线性回归方程为：y=0.123x-0.1248，r=0.9998，可溶性糖含量=（标准曲线查得的糖量×提取液总体积）/（植物质量×测量用提取液的体积×106）×100%。 　　1.4.5POD、SOD、CAT活性测定 　　提取液制备：称取1.0g不定芽，剪碎后加入预冷的研钵，加2mL预冷的磷酸