精子DNA完整性对夫精人工授精妊娠结局影响研究.docVIP

精子DNA完整性对夫精人工授精妊娠结局影响研究 　　【摘要】 目的：研究精子DNA完整性对夫精人工授精妊娠结局的影响。方法：选取2011年1月-2013年1月在本院收治的111例男性不育症患者作为研究对象，根据精子DNA完整性将其分为A组（精子DNA完整性30%）34例、B组（30%精子DNA完整性60%）42例以及C组（精子DNA完整性≥60%）35例，观察三精子质量及人工授精后的妊娠结局。结果：B、C组的临床妊娠率、精子总数、前向运动精子率均明显高于A组，差异均有统计学意义（P0.05）。虽然C组的生化妊娠率、临床妊娠率、精子总数、前向运动精子率高于B组，但仅精子总数、前向运动精子率差异有统计学意义（P0.05）。三组患者的临床妊娠率以及精子数目、前向运动精子率均为A组B组C组。结论：精子DNA完整性与人工授精妊娠结局密切相关，DNA完整性越好，精子质量越好，妊娠率越高。 　　【关键词】 不育症； 夫精人工授精； DNA完整性； 临床妊娠率 　　男性不育症是临床常见疾病，其发生与精子质量不良密切相关。目前研究认为，精子DNA完整性会影响精子质量，DNA破碎程度增高会产生负面影响，造成不育和反复流产[1]。人工授精是治疗男性不育症的主要方法之一[2]。本研究分析精子DNA完整性对夫精人工授精妊娠结局的影响，现报告如下。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 选取2011年1月-2013年1月在本院收治的111例男性不育症患者作为研究对象，纳入标准：（1）符合第5版《WHO人类精液检查与处理实验室手册》中男性不育症的诊断[3]；（2）符合人工授精启动标准；（3）取得患者知情同意，并签署人工授精知情同意书。111例男性不育症患者研究期间无失访、脱落病例，根据精子DNA完整性将其分为A组（精子DNA完整性0.05），具有可比性。 　　1.2 方法 　　1.2.1 精液常规检查 人工授精治疗当日，患者未排精3～7 d，在取精室内通过手淫法收集精液，精液液化后检测精子总数、精子浓度和精子活力等。 　　1.2.2 精子完整性检测方法 （1）准备：手淫取出的精液在pH 7.4的磷酸盐缓冲液中洗涤，离心后悬浮精子至浓度为10×106/mL；（2）制片：70 μL的l%低熔点琼脂糖于融化于65～90 ℃水中，并在37 ℃下放置约3 min，后加入处理后的精子悬液30 μL，混匀后吸取20 μL混合液体，滴在0.65%标准琼脂糖凝胶包被的玻片上，盖上盖玻片，4 ℃冰箱放置3～5 min，取出后揭去盖玻片；（3）样本处理：将载玻片放入新鲜的0.08 mol/L盐酸中，22 ℃下避光7 min，后放入含0.4 mol/L DTT的精子裂解液内约25 min，再将载玻片置于PBS 5 min，后依次置入70%、90%、l00%的乙醇，晾干备用；（4）染色：用瑞士吉姆萨染液染色25～20 min；（5）观察并计数：载玻片自然风干后，于40倍显微镜下观察至少200个精子，判断标准：精子头部周围晕环宽度不小于精子头部半径，认为该精子染色质DNA完整，否则则认为精子DNA完整性破坏。精子完整性=DNA完整精子数/计数精子总数×100%[4]。 　　1.2.3 人工授精操作方法 女方选择枸橼酸氯米芬片或注射用尿促性素（HMG）对女方进行促排卵治疗，根据卵泡监测大小及血清LH、E2水平适时注射人绒毛膜粗性腺激素（hCG）5000～10 000 U，24～36 h后行人工授精治疗，男方精液行梯度离心法进行优化选择，次日检测排卵情况，排卵后给予黄体酮胶丸200 mg口服，每晚1次，或黄体酮注射液20 mg，每日1次支持治疗。2周后，检测尿液中hCG水平，阳性为生化妊娠，4周后，行阴道B超检查，若宫腔内可见孕囊则为临床妊娠。 　　1.3 观察指标 统计患者精液处理前的精液质量，包括精子总数、精子浓度、前向运动精子，同时统计各组的生化妊娠数及临床妊娠数。 　　1.4 统计学处理 采用SPSS 18.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，用完全随机设计方差分析，计数资料采用 字2检验，以P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　B、C组的临床妊娠率、精子总数、前向运动精子率均明显高于A组，差异均有统计学意义（P0.05）。虽然C组的生化妊娠率、临床妊娠率、精子总数、前向运动精子率高于B组，但仅精子总数、前向运动精子率差异均有统计学意义（P0.05）。三组患者的生化妊娠率、临床妊娠率以及精子数目、前向运动精子率均为A组B组C组，见表1。 　　3 讨论 　　不育症是指育龄期机体功能正常的夫妇在保持正常性生活、且未采用避孕措施的条件下，超过1年时间仍未能生育[5-6]。不育症占不孕不育症的比例超过30%。相关的研究认