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精子保存方法在黄颡鱼规模化繁殖中应用 　　摘要： 以受精率为标准，通过黄颡鱼（Pelteobagrus fulvidraco）繁苗试验，分析了3种保存液在黄颡鱼规模化生产中的应用效果。结果表明，应用黄颡鱼精子保存专用液的授精效果较佳，当雌雄配组比例分别为500 ∶ 1、250 ∶ 1、50 ∶ 1时，3组之间的受精率均不存在显著差异。规模繁殖生产中，授精时间控制在1 5 h内，可将单尾雄鱼配组繁殖的雌鱼数量提高到300～500尾，有效提升黄颡鱼雄鱼使用及规模化繁苗效率。 　　关键词： 黄颡鱼；规模化繁殖；受精率；精子保存；受精率 　　中图分类号： S961 2 文献标志码： A 　　文章编号：1002-1302（2015）08-0226-02 　　黄颡鱼（Pelteobagrus fulvidraco）属鲇形目?科黄颡鱼属，是小型底栖经济鱼类，在我国各大水系均有分布。黄颡鱼肉质细嫩、味道鲜美、无肌间刺，深受广大消费者欢迎。近年来，江苏省各地区已广泛开展了黄颡鱼池塘养殖，但其种苗规模生产问题未能得到很好解决，主要存在亲本量需求大、劳动强度大、雌雄鱼发情时间难以同步及需要大量杀雄鱼采精等问题 [1-2]。开发应用黄颡鱼精子保存技术有助于提高黄颡鱼精子利用率，减少雄亲鱼宰杀量及劳动量，提高繁苗效率，提升经济效益。有关黄颡鱼精子生理特性、保存液配方及保存条件研究已有报道 [3-7]，但有关保存方法在黄颡鱼规模化生产中的应用效果研究报道较少。本研究筛选出授精效果较好的精子保存液，确定适宜的雌雄配组比例及繁殖时间，旨在为促进黄颡鱼规模化繁殖提供依据。 　　1 材料与方法 　　1 1 材料 　　黄颡鱼亲本均为江苏省南京市水产科学研究所黄桥滩苗种繁育场自行培育，黄颡鱼雄鱼平均规格达0 2 kg，雌鱼平均规格达0 1 kg，亲鱼体表无伤无病，发育情况良好。电子秤，1、5 mL移液枪，着卵网片，玻璃瓶等。 　　1 2 精子保存液制备 　　选择A、B、C 共3种精子保存液 [6-8]。精子保存液A为黄颡鱼精子保存专用液：NaCl 7 68 g，KCl 0 22 g，NaHCO3 025 g，NaCO3 0 21 g，葡萄糖2 g/L蒸馏水。精子保存液B为渔用任式液：NaCl 7 8 g，KCl 0 20 g，CaCl2 0 21 g，NaHCO3 0 021 g/L蒸馏水。精子保存液C为生理盐水：NaCl 7 g/L蒸馏水。 　　1 3 精子采集与保存 　　试验鱼捕捞后暂养于水泥池，采精前12 h对雄鱼注射促黄体素释放激素A2（LHRH-A2）、绒促性素（HCG）、马来酸地欧酮（DOM），以促进精子成熟。采集精子时剖开雄鱼腹腔，用镊子取出精巢（2 mg/尾），去除血丝，在干净的培养皿中剪碎，纱网过滤，将单尾雄鱼的精液收集到各精子保存液中，保存液均为25 mL。整个取精过程在人工授精前0 5 h内快速完成，避免精子与水接触，常温下避光保存。 　　1 4 黄颡鱼人工授精 　　黄颡鱼规模化生产过程中，根据不同雌雄配比条件，通过人工授精来验证3种保存液在2 h内常温保存的精子授精效果。在人工授精前24 h对雌鱼注射渔用HCG、LHRH-A2、DOM混合药物，以促使其卵子成熟。待90%以上雌鱼卵子成熟后（可轻松挤出）进行人工授精，挤压雌鱼的腹部，使鱼卵排入无水的不锈钢盆中，避免鱼卵与水接触。用移液枪取保存的精液，加入0 3%盐水激活，迅速倒入卵盆中，人工搅拌均匀，使卵子和精子充分结合授精，再将受精卵均匀布置在着卵网片上，在充气及流水条件下孵化，10 h后观察并计数受精卵，统计其受精率。 　　1 5 试验设计 　　探讨不同保存液配方、不同雌雄配组比例、不同保存时间3个条件对黄颡鱼精子保存液的授精效果，对比A、B、C 3种精子保存液授精效果，并确定黄颡鱼规模化生产中适宜的雌雄配组授精比例。经测量，单尾雌鱼挤出卵的平均质量为13 74 g，试验过程中采用的卵量均按这一标准执行，各试验组使用的鱼卵量及精液量见表1。 　　1 6 数据统计 　　随机抽取各试验组布卵网片9片，每片随机抽取3个约12 cm2的区域，统计其受精率，再计算各组平均值，应用SigmaPlot软件分析数据差异性。 　　2 结果与分析 　　2 1 3种保存液在不同雌雄比例配组中的授精效果 　　不同配方精子保存液对精子的活力、授精能力都会产生很大影响，并直接影响人工繁殖的受精率。由表2可知，在黄颡鱼亲本雌雄尾数比为50 ∶ 1条件下，采用精子保存液A、B、C组的人工繁殖受精率差异不显著，其平均受精率分别为82 7%、84 6%、80 4%。在黄颡鱼亲本雌雄尾数比为250 ∶ 1条件下，采用精子保存液A、B进行人工繁殖的平均受精率分别为85 3%、82 8%，