茶多酚对慢性酒精摄入所致大鼠睾丸组织损伤保护作用.docVIP

茶多酚对慢性酒精摄入所致大鼠睾丸组织损伤保护作用 　　[摘要] 目的 观察茶多酚(TP)对慢性酒精摄入所致大鼠睾丸组织损害的保护作用,为优生优育提供一定的理论基础。方法 选用32只雄性SD大鼠随机分为四组,检测大鼠精液中精子密度,精子活动力和精子畸形率;同时检测睾丸组织中超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSHpx)的活性,丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)的含量。结果 与酒精组比较,TP+酒精组精子密度增多,精子活动力增强,精子畸形率降低;大鼠睾丸组织ROS,MDA水平明显较低(P0.05),而SOD,GSPpx活性显著升高(P0.05)。结论 长期慢性酒精摄入对睾丸功能具有氧化损害作用,TP可以作为一种预防性的抗氧化剂减轻这种氧化作用,其机制与清除自由基、抑制脂质过氧化反应有关。 　　[关键词] 茶多酚;慢性酒精中毒;睾丸;损害;保护作用 　　 　　在日常生活中,饮酒是一种十分普遍的现象,长期饮酒伴随多种疾病的产生。不孕不育症是一种常见病,在育龄期约有15%的夫妇患有不孕不育的疾患。近年来,现代社会随着人们生育年龄的不断推迟,男性不育有逐渐上升的趋势[1]。由男方因素导致的不育症,在世界各地报道不一,约占26%～59%,因此对男性不育症的病因和病理机制的研究日益受到重视[2]。在众多致病因素中,酒精对生殖器官的损伤是导致受孕机会下降和出生缺陷的重要原因之一[3]。 　　茶多酚(tea polyphenol,TP)是从天然植物茶叶中分离提纯的多酚类化合物。世界上多个国家和地区,尤其是中国、日本等国对TP开展了大量研究。研究发现TP具有抗菌、抗毒、防癌抗癌、抗突变、抗衰老等多种药理作用,尤其在抗氧化、保肝护肝和免疫调节等方面效果显著[46]。但有关TP减轻慢性酒精中毒所致大鼠睾丸组织损伤的报道甚少。本实验在建立慢性酒精中毒损害生殖系统动物模型的基础上,观察了TP的抗损伤作用。? 　　 　　1 材料和方法? 　　 　　1.1 材料? 　　1.1.1 实验动物 选用雄性健康性成熟SD大鼠32只[(体质量180±25 g)],南方医科大学实验动物中心提供。 　　1.1.2 试剂与主要仪器 　　茶多酚,购自深圳市神茗生物科技有限公司;SOD,GSHpx,MDA, ROS试剂盒和Comas蛋白试剂盒(南京建成生物工程研究所)。KR20000T型低温超速离心机(德国Hettic公司)。酒精由天津北方化学玻璃购物中心出产(无水乙醇,分析纯)。? 　　1.2 实验方法? 　　1.2.1 动物分组及处理 将SD大鼠按照体质量随机分成四组,每组8只。对照组:蒸馏水灌胃;酒精组:7.5g/(kg#8226;d)酒精灌胃。TP+酒精组:200 mg/(kg#8226;d)TP灌胃; TP+酒精组:400 mg/(kg#8226;d)TP灌胃,0.5 h后,7.5g/(kg#8226;d)酒精灌胃,灌胃量为1.5 ml/100 g,1次/d,连续3月。3月后乙醚麻醉,拉颈处死,取睾丸组织,其中一侧睾丸于Borrin固定液中,另一侧睾丸入液氮中速冻,80℃保存备用。? 　　1.2.2 精液精子密度、精子活动率和精子畸形率检测 取20 μl精子悬液稀释10倍,按红细胞计数法记录5个方格内的精子数,所得值×106×10即每毫升精液中的精子数;取一滴精子悬液滴于载玻片上,加盖玻片,在高倍镜下记录200个精子中活动与不活动的精子数,计算其活动率;取一滴经固定后冰片滴片,自然晾干,HE染色。每片观察10个不同视野各100个精子,计算头、颈及尾部畸形精子的畸形率(%)。? 　　1.2.3 睾丸组织中SOD、MDA、ROS和GSHpx指标测定方法 取睾丸组织加入预冷的PBS中,冰水浴中制成10%匀浆,1000r/min,4℃离心10 min,取上清进行下列指标测定:黄嘌呤氧化酶法测定SOD,硫代巴比妥酸法测定MDA,比色法测定ROS,DTNB比色法测定GSHpx,Comas法测定蛋白质,结果以每mg睾丸组织蛋白质所含U或nmol表示。? 　　1.3 统计学方法 以SPSS13.0软件进行各组间单因素方差分析,P 0. 05 表示差异有显著性。? 　　 　　2 结果? 　　 　　2.1 TP对酒精所致大鼠精液的精子密度、精子活动率、精子畸形率的影响 与对照组比较,酒精组精子密度明显降低、精子活动力下降、精子畸形率增加(P 0.01),表明酒精能显著损伤精子的生成。与酒精组比较,TP+酒精组精子密度增多,精子活动力增强,精子畸形率降低(P 0.01),且该作用随TP浓度升高而增加(表1),TP能逆转酒精的损伤作用。? 　　2.2 TP对酒精所致大鼠睾丸组织SOD,MDA,ROS和GSHpx的影响 与对照组比较,酒精