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胸腺五肽对重症肌无力药效分析 　　【摘要】 目的：探讨分析胸腺五肽对重症肌无力的药效。方法：选取30只雌性小鼠（C57BIJ6），随机将其分为治疗组（2 d给1次药）、模型对照组、正常对照组，每组各10只。以荧光显微镜技术检测CD4+、CD8+的结果，分析胸腺五肽对重症肌无力小鼠T淋巴细胞亚群产生的影响，并与其他组别对照。结果：三组免疫后用药治疗前体重如下：治疗组为（21.42±1.53）g，模型对照组为（21.38±1.46）g，正常对照组为（19.91±1.30）g。与正常对照组比较，治疗组和模型对照组的体重均明显增加，差异均有统计学意义（P0.05）；CD4+/CD8+比值结果：正常对照组治疗组模型对照组，与模型对照组比较，正常对照组和治疗组比值接近，差异均有统计学意义（P0.05）。结论：胸腺五肽对重症肌无力的药效显著，可进行免疫调节。 　　【关键词】 胸腺五肽； 重症肌无力； 药效 　　doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2015.29.006 　　重症肌无力属于一种因传递功能障碍（神经-肌肉接头处）所致的自身免疫性疾病，临床表现为骨骼肌无力（部分或全身）、易疲劳，症状在活动后加重，经过休息后症状减轻。该病患病率在77/100万～150/100万，年发病率在4/100万～11/100万，可发生在任何年龄段，以1～5岁儿童多见。临床治疗该病方法较多，但疗效不够理想，尚无公认标准治疗方案[1]。从发病机制方面研究，重症肌无力发生、进展中T细胞、胸腺起到重要作用，出现自身免疫性疾病和抑制性的T细胞活性下降，导致免疫调节性的T细胞亚群失衡，致使B细胞过多产生自身抗体相关[2]。所以，治疗重症肌无力应考虑对T细胞亚群进行调节，使之平衡。胸腺五肽是由五种氨基酸（酪氨酸、缬氨酸、天门冬氨酸、赖氨酸、精氨酸）组成。诱导T细胞分化是其作用之一，具有免疫调节功能。对于免疫力低下者，动物整体实验或离体实验证实，胸腺五肽可诱导T细胞分化，使外周T淋巴细胞活化，具有免疫调节活性[3]。本研究以免疫荧光技术检测胸腺五肽对重症肌无力小鼠T淋巴细胞亚群产生的影响，并与其他组别对照，以分析胸腺五肽对重症肌无力的药效，现具体报告如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物及试剂 选取30只雌性小鼠（C57BIJ6），8周龄，平均体重（19.55±1.24）g（提供单位：北京市维通利华动物有限公司）。将所有小鼠随机分为治疗组（2 d给1次药）、模型对照组、正常对照组，每组各10只。合成多肽（26肽链），TP-5序列（提供单位：深圳翰宇生物有限公司）。完全福氏佐剂（提供单位：美国Sigma公司）。BBC裂解液（提供单位：北京中杉金桥生物技术有限公司）。黏片剂，一抗CD4、CD8，二抗（提供单位：天津灏洋生物有限公司）。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 给药情况 所有小鼠均在清洁级条件下进行喂养管理，治疗组免疫成为重症肌无力模型后，给药操作为胸腺五肽，0.25 mg/次（药液容积0.5 mL），2 d给1次药，持续用药2周；模型对照组免疫成为重症肌无力模型后，给药操作以等量生理盐水代替药物；正常对照组的免疫、给药操作均以等量生理盐水代替药物[4-5]。 　　1.2.2 建立重症肌无力模型 制备第1次免疫注射乳剂，把20 μg合成多肽（26肽链）溶于100 mL PBS缓冲液（pH 7.2），加入等量完全弗氏佐剂，混合充分直至油滴吸附油滴吸附全部水溶液。第1次选取背部6处和两后肢垫，每处注射20 μL，选取尾基部注射40 μL。制备第2次免疫注射乳剂，把20 μg合成多肽（26肽链）溶于50 mL PBS缓冲液（pH 7.2），加入等量完全弗氏佐剂，混合充分直至油滴吸附油滴吸附全部水溶液。在第1次注射4周后进行第2次注射，选取背部3处每处注射20 μL，选取尾基部注射40 μL。重症肌无力症状通常会在注射2周后出现[6-7]。 　　1.2.3 提取T细胞 内眦取血1 mL，置入离心管（5 mL）中，4 ℃环境静置30 min，以3000转速离心10 min，去血清。将RBC裂解液（1.5 mL）加入到沉淀血细胞内，翻转混匀，在15 ℃环境静置15 min，期间进行1～2次混匀，以2500转速离心10 min，去清液；以PBS溶液反复洗涤，以2500转速离心10 min，直到沉淀内红色消失。加入PBS溶液（100 μL），制成T细胞悬液，4 ℃环境静置备用[8]。 　　1.2.4 CD4+、CD8+细胞计数 取T细胞悬液（5 μL）均匀涂到载玻片（已加粘片剂）上，晾干。在载玻片上滴加固定剂，2～3 min后，以PBS溶液洗涤，之后晾干。载玻片上加一抗后，置于湿盒内，37 ℃环境培养30 min，以PBS溶液