葛枣猕猴桃组培繁殖研究.docVIP

葛枣猕猴桃组培繁殖研究 　　摘要:以葛枣猕猴桃越冬芽发出的嫩茎作外植体进行离体培养,用腋芽增殖途径形成再生植株,筛选出了效果较好的诱导培养基:继代增殖培养茎和生根培养基,建立了完整的组培快繁体系。 　　关键词:葛枣猕猴桃;组织培养;快繁体系 　　 　　葛枣猕猴桃(Actinidia polygama)为猕猴桃科的多年生滕本植物,自然分布于我国东北三省、朝鲜和日本等地。其果实含有丰富的维生素、氨基酸和微量元素,果实和叶片中还含有许多生物活性物质和医药成份,对早期快速生长的肿瘤具有明显的抑制作用。日本人用其叶片制成保健茶叶,十分畅销。寄生在果实中的瘿蝇具有强心利尿、祛风湿、回春等功效。所以,葛枣猕猴桃在市场上有十分广阔的发展前景。葛枣猕猴桃在我国东北分布虽然较广,但多是呈零星分布状态,自然资源不多。加之用途广泛,采收强度大,资源日趋减少。对葛枣猕猴桃进行组织培养,有利于快速推广其优良品系,扩大种群数量,为繁荣林区经济做出贡献。此前,葛枣猕猴桃组培仅见于刘永立等的报道,他们从叶柄愈伤组织分化出了不定芽并长成了完整植株。而本研究则是通过腋芽增殖的途径获得了试管苗并建立了组培快繁体系。 　　1 材料和方法 　　2 月下旬至3月上旬,剪取葛枣猕猴桃茎段,在室内水培催芽。当腋芽萌动抽出的嫩茎叶长约2cm左右时,从茎部将其切下,放入自来水中冲洗5分钟,洗去表面污物,向水中加入几滴洗洁精,摇动片刻后,置于自来水龙头下冲洗至泡沫全无。倒去自来水后,将材料放入0.1%氯化汞溶液中消毒6至8分钟,在超净工作台上,用灭过菌的蒸馏水浸泡清洗5-6次,将氯化汞残液洗净,用无菌滤纸吸干材料上的多余水分。切去断口部分,将材料切成单芽茎段后接种到诱导培养茎中。 　　接种时先用手术刀将材料的剪口部位切去,用长镊子夹取材料将其直接插入培养基约0.8~1.0cm并使其保持直立,每个培养基组合接六瓶,每瓶接种材料五个,接种后一周内及时观察杂菌污染情况,若发现培养瓶内发生污染立即把未污染的材料转移到新鲜的培养基或重新接种补齐。接种分别使用MS、WPM和WHITE三种基本培养基,补加0.5-2.0(单位:mg/L下同)的 6-苄基嘌呤(BA)或1.0的6 - 呋喃氨基嘌呤(KT),0.05的α-萘乙酸(NAA)和1-4%的蔗糖,为了便于单因子比较培养基组合详见表1。 　　继代增殖使用的培养基为:MS+BA0.5+NAA0.02+2%蔗糖和WHITE+BA0.5+NAA0.02 　　+2%蔗糖。 　　生根培养基按表二配制,其组成成分见表2。 　　培养基配完后加0.6%的琼脂粉,溶化后用0.1N的NaOH将PH调至5.8,分装后在1Kg/cm2条件下热压灭菌20min。 　　接种后的材料置于架上光照培养。培养时昼夜温度变化于20~25℃,白天补充日光灯照明14h,光强度2000lx。 　　试管苗移栽采用珍珠岩,蛭石,沙壤土三种基质。 　　2结果和讨论 　　2.1诱导培养 　　材料接种后约一周,腋芽开始膨胀。再经5~6天腋芽开裂长出新的幼芽。接种后20天新芽进入正常生长阶段。部分材料由于太过细弱或由于灭菌时间过长使外植体受到药害,逐渐黄化枯萎,接种后25天时调查材料生长情况见表1。 　　在以MS为基本培养基的组合中,以BA1.0+NAA0.05和2%蔗糖的2号培养基的生长情况最好,诱导率高达80.00%,BA的浓度为2.0和0.5时诱导率分别下降为76.77%和56.67%。在用KT1.0取代BA1.0的4号培养基中,诱导率为73.33%,说明在本实验条件下,KT的效果不及BA。因此,激素的合理使用对诱导效果有重要作用。若仍采用较优的2号培养基的激素组合,而只将蔗糖浓度调整到1%和4%,诱导率则分别下降到56.67%和30.00%,这说明在葛枣猕猴桃的茎段培养中,蔗糖浓度不宜偏高和偏低,蔗糖浓度为4%时的诱导率较2%时降低幅度达62.50%,所以,较高的蔗糖浓度尤其不宜。 　　从同时进行的7号和8号培养基组合来看,无机盐总量中等的WPM培养基和无机盐总量偏低的White培养基,其诱导率分别为70.00%和50.00%,均低于有同样附加成分的MS培养基。看来,在葛枣猕猴桃茎段诱导培养阶段,仍以无机盐总量偏高的MS效果为好,无机盐总量偏低的White培养基其诱导效果最差。 　　2.2 继代增殖 　　当材料长到3~4cm高时,可从节间处将其剪成单节茎段,转入继代培养基中进行增殖。继代培养采用MS和White两种基本培养基,由于此时试管苗内的激素成分已有所积累,故将BA和NAA浓度分别降至0.5至0.02。这时的材料已完全适应培养基的条件且处在旺盛生长期,生长速度和增殖速度都很快。通过比较发现,从两种继代增殖培养基的效果看,MS培养基好于Whit