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臭菘根部分离一种酪氨酸酶抑制剂研究 　　摘要：目的：对臭菘根部中分离的一种化学成分的酪氨酸酶抑制活性进行研究。方法：利用色谱柱分离纯化再根据理化性质和波谱技术对化合物进行结果鉴定，采用酶动力学方面对臭菘根部分离得到的化合物3，5-二甲氧基-4-O-B-D-吡喃葡萄糖基桂皮酸其酪氨酸酶抑制研究。结果：从臭菘植物根部的甲醇部分分离的化合物3，5-二甲氧基-4-O-B-D-吡喃葡萄糖基桂皮酸，对单酚酶（IC50=0.4毫摩尔/升）和二酚酶（IC50=0.25毫摩尔/升）都具有抑制作用。结论：从臭菘植物根部首次分离得到的化合物3，5-二甲氧基-4-O-B-D-吡喃葡萄糖基桂皮酸为酪氨酸酶的竞争型可逆性抑制剂，抑制常数（KI）为3.0997 毫摩尔/升。 　　关键词：臭菘;酪氨酸酶;抑制作用;动力学;3，5-二甲氧基-4-O-B-D-吡喃葡萄糖基桂皮酸 　　中图分类号：TQ464.8 文献标识码： A DOI编号： 10.14025/j.cnki.jlny.2014.24.0017 　　臭菘为天南星科（Araceae）臭菘属（Symplocarpus）多年生宿根草本植物，分布于东西伯利亚鄂霍茨克、中国东北部、北美东部、朝鲜半岛和日本，在中国主要分布于吉林省、黑龙江和乌苏里江流域以及松花江流域[1-4]。 　　臭菘生长于海拔300米以下地区，常生于湿草甸、沼泽或沼泽落叶林中、潮湿针叶林及混交林下，河渠的水流中也有生长。据《中华本草》记载在药理方面臭菘的根煎剂具有镇静、解痉和祛痰作用，解表止咳，化痰平喘，主治发烧头痛、气管炎咳喘等。臭菘叶主治风湿痹痛，有祛风除湿的功效。臭菘种子亦有镇咳、祛痰、平喘、强心的药效，主治气管炎咳喘[5]。目前对臭菘的化学成分及其活性的研究报道很少，本实验从臭菘根部的甲醇部分得到1个化合物，经波谱分析，鉴定其为3 5-二甲氧基-4-O-B-D-吡喃葡萄糖基桂皮酸（为该植物首次分离得到），由于其是肉桂酸类衍生物亦为羧基化合物，据文献报道此类化合物有对酪氨酸酶的抑制作用[6-8]，而作为酪氨酸酶的抑制剂，可作于防止食品褐变的添加剂、化妆品美白的功能成分以及农业害虫的调节剂等[9，10]。本文从酶动力学角度分析了3，5-二甲氧基-4-O-B-D-吡喃葡萄糖基桂皮酸的酪氨酸酶抑制活性，为臭菘植物作为天然产物的开发与利用提供参考。 　　1 实验方法 　　1.1 仪器与材料 　　Varian Inova500型核磁共振仪，LCQ型质谱仪，ZF-1型三用紫外分析仪，凝胶Sephadex LH-20，RE-52AA旋转蒸发仪，TU-1810紫外分光光度计，GB204电子分析天平，GF254硅胶板、柱层析用硅胶均为青岛海洋化工厂所产，L-酪氨酸（L-Tyrosine）、左旋多巴（L-DOPA）、酪氨酸酶均为SIGMA公司产品，其他药品、试剂均为分析纯。 　　臭菘[Symplocarpus foetidus （Linn.） Salisb.]采于吉林省临江市老三队地区（N：41.56.596°、41.94452°E：126.81072°、126.8019°H：370m、573m正西坡）。经吉林农业大学园艺学院胡全德教授和中药材学院李长田副教授鉴定，所采植物样品为臭菘属（Symplocarpus）臭菘（S. foetidus）植物。 　　1.2 提取与分离 　　将臭菘晾干，取干根2公斤，用95%工业酒精60℃回流提取3次，合并提取液，解压浓缩至浸膏无溶剂味，加水悬浮，分别用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯各萃取3次，将萃取后的剩余部分用硅胶色谱柱、氯仿―甲醇系统进行梯度洗脱，又经凝胶纯化和重结晶等分离手段得193.23毫克白色晶体化合物。 　　1.3 结构鉴定 　　化合物为白色结晶（甲醇），1H NMR （300 MHz， DMSO）δ 12.29（s，1H）， 7.51（d，J = 15.9 Hz，1H），7.03（s， 2H），6.53（d，J = 15.9 Hz，1H），5.03（d，J = 7.4 Hz，3H）， 4.95（d，J = 17.3 Hz，2H），4.43（d，J = 25.4 Hz，1H），4.31（t， J = 5.3 Hz，1H），3.62 - 3.50（m，1H），3.40（dd，J = 11.4， 5.7 Hz，2H），3.19（s，2H），3.10（dd，J = 25.3，8.7 Hz，3H）。 　　13C NMR（101 MHz，DMSO）δ 167.55（C-1），118.36（C-2），143.87（C-3），129.59（C-1），106.65（C-2，