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苦瓜组织培养体系研究 　　黄　勇　汤青林　宋　明 　　摘要：本试验以重庆普遍栽培的滨江二号、长白、碧玉3个苦瓜品种为材料进行组织培养，筛选出适合下胚轴分化的培养基为MS+6-BA3～5mg／L+NAA0.5mg／L，分化率平均为9.98％。分化速度极快，一般5～6天就可分化，更甚者2～3天就可分化。其中碧玉品种的下胚轴在MS+6-BA3mg／L+NAA0.5mg／L培养基中分化率最高，为16.70％。子叶分化情况不理想。 　　关键词：苦瓜；组织培养；影响因素 　　 　　苦瓜，别名凉瓜，学名Momordica charantia L.，是葫芦科苦瓜属蔬菜作物，其染色体条数2n=2X=22。目前有关苦瓜组织培养成功的报道极少。申洪业等(1997)发现苦瓜下胚轴极易形成愈伤组织，但未分化不定芽。唐琳等(1999)进一步研究了植物生长物质对丛芽诱导和生根的影响，发现在苦瓜的离体培养过程中极易产生愈伤组织，但由愈伤组织诱导不定芽的分化很困难，难以形成再生植株。本试验对苦瓜组织培养进行了研究，旨在建立良好的离体快繁体系；从而为苦瓜多倍体的离体诱导以及苦瓜遗传转化等转基因研究奠定基础。 　　 　　1　材料与方法 　　 　　1．1　材料 　　滨江二号、长白、碧玉3个苦瓜品种。 　　 　　1．2　方法 　　1．2．1　种子无菌萌发。去掉苦瓜种子坚硬的种皮，先温汤浸种10分钟，再室温浸种24小时后，用0.1％的升汞消毒8～10分钟，无菌水冲洗5-6次，转入MS培养基无菌萌发，约9～10天子叶完全展开，切取0.5cm左右的子叶块和下胚轴段作为外植体。 　　1．2．2　愈伤组织诱导与不定芽的分化。以MS为基本培养基，BA为5个浓度水平(1mg／L、2mg／L、3mg／L、4mg／t、5mg／L)，NAA为三个浓度水平(0.1mg／L、0.2mg／L、0.5mg／L)，配成15个不同激素组合的培养基。切取子叶和下胚轴为外植体，分别接种。每种外植体每个组合接种15瓶，每瓶接种5～6个外植体。观察愈伤组织诱导与不定芽的分化情况。 　　1．2．3　继代培养与芽的增殖。以MS为基本培养基，BA为3个浓度水平(3mg／L、4mg／L、5mg／L)，NAA为0.5mg／L，配成3个不同激素组合的继代培养基。待不定芽长大到4cm左右时将其切成0.5cm左右的带芽点的茎段，接种到继代培养基中，观察增殖效果。 　　1．2．4　生根培养。生根培养基以I／2MS附加不同浓度NAA(0.1mg／L、0.2mg／L、0.5mg／L)。切取长4cm左右的单芽转入生根培养基，观察生根情况。 　　1．2．5　移栽。揭开封口膜炼苗2天后，将植株根部粘着的培养基洗净，移栽到育苗室。 　　 　　2 结果与分析 　　 　　2．1　种子无菌萌发 　　因苦瓜种皮厚而坚硬，有碍种子吸收萌发必需的水分和养料。去除种皮有利于种子吸收培养基中的水分和养料。由表1可知，经过去除种皮和温汤浸种，滨江二号、长白、碧玉3个苦瓜品种均有较高的发芽率，分别为66.7％、73.3％、100％，其中碧玉苦瓜发芽率最高，并且发芽整齐、苗壮，是较理想的组织培养材料。由此表明：温汤浸种可促进出苗，保证出苗整齐，增强种胚和幼苗抗性，具有培育壮苗的作用。 　　 　　2．2　愈伤组织诱导 　　试验表明：3个苦瓜品种(滨江二号、长白、碧玉)均极易形成愈伤组织，在不同浓度BA和NAA配制的15种配方中，愈伤组织诱导率可达100％，并且生长快速、良好。一般2～3天可见外植体开始膨大，1周左右可见外植体边缘产生大量愈伤组织，2～3周愈伤组织包埋外植体。苦瓜之所以极易形成愈伤组织，可能是因为本身体内生长激素含量高。 　　试验形成的愈伤组织有3种类型：一种是致密、颗粒状、绿色；一种是致密、颗粒状、黄绿色；一种是松散、沙状、黄色。在我们的试验中，绿皮品种(碧玉、滨江二号)形成前2种愈伤组织，而白皮品种(长白)则形成第3种愈伤组织。 　　 　　2．3　不定芽分化 　　试验表明：6-BA浓度为1mg／L、2mg／L，NAA为0.1mg／L、0.2mg／L、0.5mg／L的6个激素组合或者6－BA为3mg／L、4mg／L、5mg／L，NAA浓度为0.1mg／L、0.2mg／L的6个激素组合均不能诱导不定芽的分化。其余3个激素组合均有不同程度的分化率(表2)，而且在能够分化不定芽的培养基上，外植体刚形成少量愈伤组织甚至未形成明显愈伤组织时，就可见在子叶切块边缘或下胚轴段或愈伤组织上形成绿色或白色芽点。在我们的试验中，分化速度极快，一般5～6天就可见芽点，快者2～3天即可。而其他的报道都需2～3周左右。 　　由表2可知：当以下胚轴为外植体时，不同苦瓜品种在不同激素组合上的不定芽分化率不同。其中