脉络宁注射液中5种酚酸类成分血药浓度LC―MSMS测定及大鼠体内药代动力学研究.docVIP

脉络宁注射液中5种酚酸类成分血药浓度LC―MSMS测定及大鼠体内药代动力学研究 　　[收稿日期] 2013-12-12 　　[基金项目] 国家“重大新药创制”科技重大专项（2012Z002）；江苏省中医药领军人才项目（LJ200906）；江苏高校优势学科建设工程项目（2010） 　　[通信作者] *居文政，主任药师，博士，研究方向为中药临床药动学，Tel：（02550521，E-mail：tx_jshtcm@ 　　[作者简介] 吴婷，主管药师，研究方向为药物代谢动力学，E-mail：purplewt@126.com 　　[摘要] 通过建立准确灵敏的LC-MS/MS法，测定8只SD大鼠，单剂量尾静脉注射（4 mL?kg-1）脉络宁注射液后，血浆中绿原酸、咖啡酸、3，4-二咖啡酰基奎宁酸（3，4-DCQA）、阿魏酸、肉桂酸的浓度，所测数据使用DASver 1.0软件进行处理，计算主要药动学参数。结果显示，绿原酸、咖啡酸、3，4-DCQA、阿魏酸、肉桂酸的线性范围分别为2.006～1 027 μg?L-1（r=0.999 6），1.953～1 000 μg?L-1（r=0.999 7），28.51～1.459×104 μg?L-1（r=0.998 9），1.836～940.0 μg?L-1（r=0.997 7），4.780～2 447 μg?L-1（r=0.998 6）。方法学考察5种酚酸类成分血浆样品反复冻融3次、-75 ℃放置20 d、室温放置4 h以及血浆样品处理后的分析物放置24 h的稳定性均良好，日内、日间变异系数（RSD）小于5.0%，精密度和准确度等均符合生物样品分析的要求。大鼠体中绿原酸药代参数：t1/2为（49.78±12.81） min，AUC0-t为（123.55±14.82） mg?min?L-1，CL为（0.004 3±0.000 5） L?min-1；咖啡酸药代参数t1/2为（36.65±10.59） min，AUC0-t为（91.67±11.77） mg?min?L-1，CL为（0.005 7±0.000 7） L?min-1；3，4-DCQA药代参数：t1/2为（50.08±13.78） min，AUC0-t为（278.34±31.82） mg?min?L-1，CL为（0.001 6±0.000 2） L?min-1；阿魏酸药代参数t1/2为（51.39±15.52） min，AUC0-t为（34.72±4.67） mg?min?L-1，CL为（0.000 4±0.000 1） L?min-1；肉桂酸药代参数t1/2为（74.42±18.32） min，AUC0-t为（34.63±4.82） mg?min?L-1，CL为（0.007 7±0.001 1） L?min-1。该文所建立的LC-MS/MS适用于绿原酸等5种酚酸类成分的药代动力学研究。 　　[关键词] 脉络宁注射液；绿原酸；咖啡酸；3，4-DCQA；阿魏酸；肉桂酸；药代动力学；高效液相色谱-质谱联用 　　脉络宁注射液主要由金银花、牛膝、玄参、石斛组成，具有清热养阴、活血化瘀的功效，临床上用于治疗血栓闭塞性脉管炎、静脉血栓形成、动脉硬化性闭寒症、脑血栓形成及其后遗症等，其主要成分为绿原酸、咖啡酸等酚酸类成分。目前文献报道的中药复方制剂中单一成分的测定较多，同时测定多组成分的体内药动学研究报道较少。本文首次建立同时测定5种酚酸类成分体内药物浓度的LC-MS/MS方法，进行单剂量药动学实验，分别计算各自的药动学参数，为临床药动学研究提供参考依据。 　　1 材料 　　1.1 试药 脉络宁注射液（南京金陵制药厂，批规格10 mL/支）；对照品绿原酸（批号110753-200413）、阿魏酸（批号0773-9910）、肉桂酸（批号110786-200503）、替硝唑（批号100336-200402）均购于中国食品药品检定研究院；对照品咖啡酸（批号A0096）、3，4-DCQA（批号A0026）均购于成都曼思特生物技术有限公司。试验用水为超纯水，甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。 　　1.2 仪器 API 4000 LC-MS/MS三重四级杆质谱仪，色谱工作站Analyst 1.4.2；AE240电子天平（上海梅特勒-托利多有限公司）；MICRO-17R冷冻离心机（美国Thermo公司）；WH-2微型旋涡混合仪（上海沪西分析仪器厂）；Drict-Q5超纯水机（法国Millipore公司）。 　　1.3 动物 SD大鼠，雌雄各半，8只，体重300～350 g，由南京中医药大学实验动物中心提供，合格证号SCXK（浙）2008-0033。 　　2 方法 　　2.1 色谱及质谱