大肠杆菌的分离和培养.PPTVIP

* 大肠杆菌的培养和分离 微生物简单介绍 放线菌 单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体（种群） 菌落是鉴定菌种的重要依据 结构 异养型，兼性厌氧型，革兰氏阴性(红色)(G-) 应用 问题1：用什么培养大肠杆菌？ 培养基。 按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 液体培养基 固体培养基 凝固剂 琼脂 扩大培养，工业生产 分离纯化，鉴定菌种，计数，保藏 选择培养基 鉴定培养基 天然培养基 合成培养基 成分 作用 主要来源 碳源 主要作能源物质 无机碳(CO2) 或有机碳(糖类) 氮源 合成含N类化合物 N2，NH3，铵，硝酸盐 尿素，牛肉膏，蛋白胨 无机盐 调节渗透压等 水 生长因子 调节促生长 维生素，Aa，碱基等 细菌中性偏碱，霉菌中性偏酸。 如鉴定分解尿素的细菌，在培养基中添加酚红， 产生红色反应。 LB液体培养基与LB固体培养基。 加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物 问题2：在培养过程中如何进行维持无菌状态？ 消毒VS灭菌 芽孢为细菌的休眠体， 对不良环境有很强耐受性 较为温和的方法，如酒精 强烈，完全无菌 灭菌消毒技术是微生物有关工作中 最普通也是最重要的技术。 灭菌消毒技术大汇总 1、高压蒸汽灭菌法 1kg/cm2、121 ℃下维持15min. 0.5kg/cm2、90 ℃下维持30min. 防止温度过高，葡萄糖分解碳化 。 2、灼烧灭菌法 接种环、接种针 玻璃刮刀 3、干热灭菌法 160-170 ℃下加热1-2h。 4、G6玻璃纱漏斗过滤法 5、其他 三角瓶用封口膜、超净台操作（含紫外灯、过滤风） 在接种时要速度快 3、如何分离大肠杆菌 划线分离法 （平板划线分离法） ①培养皿倒置 ②划线的末端 出现不连续的 单菌落 涂布分离法 （稀释） 1、玻璃刮刀放在酒精溶液中待用 2、取出时要经过灼烧 3、一般要稀释菌液进行培养 稀释10-5—10-7倍， 取0.1ml不同浓度的稀释液 4、大肠杆菌的培养和分离的过程 溶解 计算称量 调pH 分装 加塞，包扎 灭菌 二 倒平板、制斜面 三 大肠杆菌的培养 四 大肠杆菌的分离 划线分离法（或涂布分离法） 使所需细菌大量繁殖 获得单菌落，纯化菌株 五 斜面接种培养 目的菌株的纯培养和菌种保存 一 配制LB培养基,并灭菌 菌种管 接种环（针） 接种 三角瓶（液体培养基） 接种在 固体培养基中 实验2：分离以尿素为氮源的微生物 1.如何设计对照？ 2.如何把液体培养基配置成固体培养基？ 3.如何完成菌液稀释？ 用什么液体来稀释菌液？ 4.用什么方法来分离这种微生物？ 5.该实验简单的设计思路是什么？ *