艾炷灸循经取穴预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡因子的影响-针灸推拿学专业论文.docxVIP

成都中医药大学硕士学位论文 50 申 明 硕士学位论文：《 艾炷灸循经取穴预处理对大鼠心肌缺血再灌损 伤心肌细胞凋亡基因的影响》 是本人在成都中医药大学攻读硕士学 位期间在导师指导下完成的，该论文成果归成都中医药大学所有。 有关学位论文成果的开发、转让、论文发表等，均需征得导师和成 都中医药大学同意。 硕士生签名  导师签名  2008 年 5 月   PAGE 27 引言 随着人们生活水平的提高和人口老龄化的到来,心血管疾病已成为现今威胁 人类生命健康的主要因素之一。近年来,我国人群心血管疾病发病率和死亡率有 持续上升的趋势。根据《1998 年全国卫生事业发展情况统计公报》,1998 年我 国心血管病死亡率在城市人群为 244.3/ 10 万,在农村人群为 193.1/ 10 万,均 被列为第一位死因[1]。有文献预计到 2020 年，冠心病将成为世界排名第一的最 重要的疾病[2]。因此，冠心病的防治研究是心血管疾病研究中的一个极为重要的 领域。 针对冠心病的各个病理环节进行的研究非常活跃，随着冠状动脉溶栓术、经 皮冠状动脉成形术（PTCA）、冠状动脉内扩张术、冠状动脉旁路等技术的推广应 用，心肌缺血再灌注损伤（MRI）越来越受到广大基础与临床工作者的重视，探 索防治心肌缺血再灌注损伤的药物与方法成为当今医学研究的热点之一。 目前研究认为心肌缺血再灌注损伤的机制主要包括氧自由基生成增多、钙超 载、能量代谢障碍、血管内皮细胞功能障碍、心肌细胞凋亡、粒细胞浸润学说[3] 。 关于心肌缺血再灌注损伤细胞凋亡的防治主要包括Caspase-3抑制剂、 抗氧化 剂、 抗炎药物、 成纤维细胞生长因子等,通过不同的途径减少细胞凋亡的发生。 中医学关于心肌缺血再灌注损伤的研究主要体现在中药（单味及复方）抗MRI 的作用机制研究，关于针灸干预心肌缺血再灌注损伤的研究相对薄弱。中药研究 机制涉及防治心肌缺血再灌注损伤,主要体现在抗氧化剂的应用、半胱氨酸激酶 家族( Caspases)受体阻滞剂、基因治疗、钙离子通道阻滞剂、血管紧张素转换 酶抑制剂(ACEI)及血管紧张素受体拮抗剂(ARB s)从???在多个环节干预MRI , 达到 防治MRI 的目的[4]。 大量研究表明细胞凋亡是缺血再灌注损伤中心肌细胞死亡的重要形式，且与细 胞钙超载、氧自由基产生等有关[5]，设想通过干预凋亡相关基因的表达可防止细 胞凋亡，从而为临床缺血再灌注的防治提供新的思路和方法。研究缺血再灌注中 细胞凋亡的机制及意义具有重要的理论及临床价值。 本课题运用艾炷灸循经取穴预处理 2 周，再结扎大鼠左冠状动脉前降支（LAD）, 造成心肌缺血再灌注损伤模型，观察其对心肌细胞凋亡相关因子 Caspase-3； Bcl-2；Bax；Fas；TNF-α及 NF-κB 的影响，旨在为针灸防治冠心病心绞痛提供 更加丰富的实验室依据，并为今后的研究打下坚实的基础。  实验研究 1 实验材料 1．1 实验动物 SD 大鼠 32 只，体重 220g±10g,雌雄各半，由成都中医药大学实验动物研究 中心提供，生产许可证号：11，检疫后备用。 1．2 实验用艾条 成都市滨江灸条厂，国药准字 1．3 实验用药物 硫氮卓酮（恬尔心，盐酸地尔硫卓片）30mg／片。浙江亚太药业股份有限公 司生产。批号 1．4 实验仪器 ALC-V8 型动物呼吸机（上海奥尔科特生物科技有限公司） BL-410 生物机能实验系统（四川成都泰盟科技） DF110 型电子分析天平（常熟仪器设备厂） Mias-2000 图形分析系统（四川大学图象分析研究所） 奥林巴斯 BX50 光学显微镜（日本） 1．5 实验试剂 一抗：Caspase-3(H-277)：兔抗 IgG；200ug／ml bcl-2:鼠抗 IgG1;200ug ／ml Bax(N－20):兔抗 IgG;200ug／ml Fas(A-20):兔抗 IgG;200ug／ml 羊多克 隆抗体：TNF-α（N-19）200ug／ml,NF-κB P65(C-20) 200ug／ml。(均购自 SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY,INC.) Caspase-3、 Bcl-2 、Bax、 Fas 、TNF-α及 NF-kB 试剂盒均购自北京中杉 生物技术有限公司。 4％戊巴比妥钠、0.9％氯化钠注射液、10％福尔马林液。 2 实验方法 2．1 动物分组 SD 大鼠 32 只分为 4 组，每组 8 只，①假手术组（下列各表中简称空白组）： 只穿针不结扎左冠状动脉（ LAD）；②缺血再灌注组（I\R）（下列各