解氏肾癌一号方对小鼠肾癌抑制作用及对Bcl―2和Bax蛋白表达影响.docVIP

解氏肾癌一号方对小鼠肾癌抑制作用及对Bcl―2和Bax蛋白表达影响 　　[摘要] 目的 探讨解氏肾癌一号方对小鼠肾癌的抑制作用及对Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。 方法 建立肾癌小鼠动物模型，分为生理盐水对照组、中药对照组、白介素-2组、解氏肾癌一号方组，计算各组抑瘤率以及采用免疫组化法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。 结果 解氏肾癌一号方组抑瘤率高于生理盐水对照组及白介素-2组，小鼠体重增加。解氏肾癌一号方组小鼠肿瘤组织Bcl-2表达下调，Bax表达上调。 结论 解氏肾癌一号方可以下调Bcl-2的表达，上调Bax的表达，从而抑制肿瘤生长，改善小鼠的生存质量。 　　[关键词] 肾癌；Bcl-2；Bax；细胞凋亡 　　[中图分类号] R737.11 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2015）01（c）-0138-03 　　肾癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，占全身恶性肿瘤的2%～3%[1]。近几十年其发病率呈上升趋势，全世界每年大约增加2.5%，每年死于肾癌的患者超过10万[2]。早期肾癌可以手术根治，但转移性肾癌缺乏有效的治疗手段。肾癌因存在多药耐药，对传统的放化疗均不敏感，虽然免疫治疗有效，但有效率仅为10%～20%[3]。临床观察发现，经解氏肾癌一号方治疗的患者，生存期明显延长，生活质量明显提高。为了进一步证实解氏肾癌一号方的作用，本文选取肾癌小鼠作为研究对象，探讨解氏肾癌一号方对小鼠肾癌的抑制作用及对Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 实验动物 BALB/C小鼠40只，雌雄各半，体重18～22 g，6～8周龄。由大连医科大学SPF动物实验中心提供，合格证明编号：SCXK（辽）2008-0002。 　　1.1.2 细胞株 BALB/C小鼠来源的肾癌细胞（Renca），购自上海拜力生物科技有限公司。 　　1.1.3 主要试剂和药品 解氏肾癌一号方由西洋参、制黄芪、炒白术、炒山药、山茱萸、制黄精、熟地、浙贝母、白芥子等共18位中药组成；中药对照组方选自孙桂芝教授所著《实用中医肿瘤学》，方用八正散治疗肾癌湿热蕴结证的“肾癌方”：?q蓄30 g，瞿麦15 g，车前子（包煎）10 g，栀子10 g，白英30 g，龙葵30 g，蛇莓30 g，半枝莲30 g，黄柏15 g，延胡索10 g，土茯苓30 g，大蓟30 g，小蓟30 g，仙鹤草30 g，竹叶10 g，共15味中药组成。凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax抗体（Proteintech Group公司）；白介素-2（山东泉港药业有限公司，国药准字批号070902）。 　　1.2 方法 　　1.2.1 分组情况 将制备好的细胞悬液以0.2 ml（2×106个细胞）/只注射于小鼠右腋皮下，共40只，每日喂养并观察小鼠肿瘤生长情况，接种2周后每组小鼠可扪及0.2～0.5 cm肿瘤结节。随机分为生理盐水对照组、中药对照组、白介素-2组、解氏肾癌一号方组。 　　1.2.2 给药方法 接种后第15天开始，按小鼠与人体间等效剂量换算表计算各组小鼠用药剂量并分组给药。生理盐水对照组：灌服生理盐水0.2 ml。解氏肾癌一号方组：灌服解氏肾癌一号方0.2 ml。中药对照组：灌服“肾癌方”0.2 ml。白介素-2组：白介素-2，3000 IU/只给药，0.2 ml/只腹腔注射（15 000 IU/ml）。各治疗组连续用药15 d。 　　1.2.3 观测指标 第30天颈椎脱臼处死小鼠并完整剥取肿瘤，称小鼠质量、瘤质量、计算抑瘤率。根据公式：抑瘤率=（C-T）/C×100%（T为实验组的平均瘤重，C为生理盐水对照组的平均瘤重）。 　　1.2.4 Bcl-2和Bax免疫组化染色和计算机图像定量分析 各组小鼠肿瘤标本经固定，石蜡包埋，连续切片，脱蜡和梯度酒精水化。按照试剂盒说明书进行免疫组化染色。显微镜下观察，以细胞质和（或）细胞膜有棕黄色颗粒为阳性。Bcl-2和Bax染色的强弱代表组织中特定蛋白表达水平的高低。应用计算机图像分析系统计算每个视野下阳性染色的平均光密度值（OD）。在相同的放大倍数下，每个切片计数10个视野，计算阳性染色所占面积。 　　1.3 统计学处理 　　采用SPSS 19.0统计软件对数据进行分析和处理，计量资料以x±s表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，以P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 各组小鼠平均瘤重及抑瘤率的比较 　　解氏肾癌一号方组、中药对照组及白介素-2组的平均瘤重均低于生理盐水对照组（P0.05）；解氏肾癌一号方组及中药对照组的平均瘤重均低于白介素-2组（P0.05），抑瘤率均高于白介素-2组（P0.05）（