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虎金丸对肝纤维化大鼠Nrf2Bach1蛋白表达影响 　　[摘要] 目的 研究虎金丸对肝纤维化大鼠Nrf2/Bach1蛋白表达的影响，初步探讨虎金丸调整机体氧化应激抗肝纤维化的作用机制。 方法 以CCl4诱导肝纤维化大鼠动物模型，采用Masson胶原染色肝脏纤维化，分光光度法检测SOD、GSH-Px含量，免疫组化法测检Nrf2、Bach1的蛋白量。 结果 从Masson染色得出，虎金丸能减轻CCL4所致的肝纤维化，显著降低胶原纤维面密度；与模型组比较，虎金丸组SOD、GSH等抗氧化酶的含量显著升高（P0.01）；虎金丸药物的使用显著降低了肝细胞组织匀浆中Nrf2的表达水平、提高了Bach1的表达水平（P0.01）。 结论 虎金丸可调控肝细胞组织匀浆中Nrf2/Bach1蛋白的表达，促进机体氧化应激的调整与抗肝纤维化。 　　[关键词] 虎金丸；肝纤维化；Nrf2；Bach1 　　[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2013）18-26-04 　　在肝纤维化的发生发展中，氧化应激起着重要作用，机体氧化/抗氧化的失衡，是肝脏炎症及肝纤维化的发展重要因素之一。核因子相关因子2（NF-E2-related factor 2，Nrf2）、转录因子Bach1（BTB and CNChomology1）在机体氧化/抗氧化失衡的调节中起着重要的作用，Nrf2通过调节肝脏抗氧化酶基因的表达增加肝脏抵抗氧化应激的能力；Bach1为Nrf2的阻遏剂，和Nrf2竞争ARE下调抗氧化酶基因的表达[1-4]。 　　虎金丸由虎杖、郁金、田七、灵芝、泽泻、山楂6味组成，具有活血化瘀、益气行滞的功效。临床上用于治疗肝纤维化有较好的疗效[5]。研究表明虎金丸能保护CCl4所致大鼠肝细胞急性损伤，具有确切的抗肝纤维化作用[6]。本研究采用CCl4诱导的大鼠肝纤维化，观察虎金丸对肝纤维化大鼠Nrf2/Bach1蛋白表达的影响，初步探讨虎金丸调整机体氧化应激抗肝纤维化的作用机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物 　　SD雄性大鼠，SPF级，体重150～180g，购自广州中医药大学实验动物中心，生产许可证号SCXK（粤）2008-0020。 　　1.2 药物及试剂 　　虎金丸供试液系按处方比例各药材加水煎煮2次，过滤，浓缩为含生药1g/mL，临用时稀释备用；阳性对照药水飞蓟素（陕西森弗高科实业有限公司）；四氯化碳（广州光华化学厂有限公司，批；MDA、SOD、GSH-Px检测试剂盒（南京建成生物研究所）；兔抗Nrf2多克隆抗体（北京博奥森生物技术有限公司，规格1mg/mL），兔抗Bach1多克隆抗体（武汉三鹰生物技术有限公司，规格37μg/150μL）。Elevision plus免疫组化试剂盒（福州迈新生物技术开发公司）；Masson三色染色液（广州威佳科技有限公司，批；苏木素和伊红（Sigma进口分装，批。 　　1.3 仪器 　　7080型日立全自动生化分析仪器株式会社日立高新技术）；UV-754紫外可见分光光度计（上海科学精密仪器有限公司）；TG-16-WS台式高速离心机（长沙湘仪离心机器有限公司）；体重计，大连星海电子衡器有限公司；MIAS图像分析系统（广州中医药大学一附院病理室）；MSHOT数码成像系统（广州市明美光电技术有限公司）。 　　1.4 造模及给药方法 　　雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、水飞蓟素组、虎金丸组，每组10只。模型组和给药组皮下注射40% CCl4花生油溶液（将CCl4与花生油以4∶6配成40%油剂），首次0.5mL/100g，随后0.3mL/100g，隔天1次，持续6周。正常组皮下注射等体积的花生油，时间与模型组相同。造模结束后，给药组灌胃相应药物，每日1次，共4周。模型组、正常组灌胃等体积的蒸馏水。为了防止肝脏自然修复对实验结果的影响，除正常对照组外，各用药组开始给药后仍同时每周注射40% CCl4油剂0.3mL/100g体质量1次[7]。 　　1.5 采集标本 　　末次给药前禁食不禁水12h，末次给药后1h，用1%戊巴比妥钠麻醉大鼠，腹主动脉采集血液，将血液室温静置2h后，2500r/min，离心20min，取上清，-80℃保存备用。采集血液后将动物处死取肝脏标本，置于冰0.9%氯化钠溶液中充分洗涤后，称重，取肝右叶标本1cm×1cm×0.5cm，用10%（v/v）的中性甲醛固定，制备石蜡切片。取肝左叶用生理盐水制成10%的肝匀浆。 　　1.6 检测指标及方法 　　1.6.1 肝脏组织病理学观察 肝组织病理学检查采用胶原纤维染色（Masson法），在光镜下观察大鼠肝组织肝纤维化程度