北玄参组织培养及毛状根培养体系的建立-生物学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 摘要 北玄参（Scrphularia buergeriana）为玄参科玄参属草本植物，是重要的 传统药材。在中国北方一直以来用北玄参替代玄参入药，有悠久的入药历史。本 研究首先对北玄参种子进行不同的消毒处理，获得无菌苗，统计种子的萌发率和 污染率，建立北玄参的无菌体系。然后分别以茎段、叶柄、叶片为外植体，采用 正交设计，研究不同植物生长调节剂配比的培养基诱导北玄参愈伤组织、不定芽 和生根培养，筛选北玄参组织培养各阶段最佳培养基组成，同时建立了北玄参的 高频再生体系。本研究还开展了 4 种发根农杆菌对北玄参遗传转化条件的研究， 建立了北玄参的毛状根培养体系。通过以上研究，结果如下： 1 北玄参种子比较小，消毒处理比较困难。研究认为直接用 0.1%HgCl2 灭菌 6 min 就能达到良好的消毒效果，污染率为 4.95%，种子萌发率为 81.49%；种子 萌发均匀，种苗发育正常，生长状态良好。 2 北玄参无性快繁体系建立以北玄参无菌苗的茎段、叶柄、叶片为试材，诱 导产生愈伤组织和不定芽，进而诱导不定根的分化，建立了北玄参的高频再生体 系。通过正交设计，适合北玄参离体再生的外植体依次为叶片＞叶柄＞茎段；诱 导外植体再生不定芽最佳培养基为 MS+6-BA 0.5mg.L-1+NAA 0.2 mg.L-1，诱导率 可达 100%，芽增殖培养基为 MS+6-BA 0.2mg.L-1+NAA 0.2 mg.L-1，增殖倍数为 9.13；诱导生根的培养基为 1/4 MS+IBA 0.2mg.L-1，生根率 100%，平均生根数为 ；再生植株移栽的成活率为 86.96%。 3 北玄参毛状根培养体系的建立以发根农杆菌 A4、R1601、C58C1 和 ATCC15834 这 4 种菌株进行侵染得到毛状根，根据诱导率的高低，得出最适合 诱导北玄参毛状根的农杆菌是 A4、R1601 菌株。对外植体（叶片、叶柄、茎段） 进行筛选，得出幼嫩的叶片较成熟的叶片作为实验材料比较合适。北玄参毛状根 诱导的条件是：预培养 2-3d，外植体侵染的时间为 10-12min，共培养天数为 2-3d， 最高诱导率可达到 90.01%。乙酰丁香酮能够促进发根农杆菌的转化，提高北玄 参叶片毛状根的诱导率。AS 的浓度为 100μmol/L 时，其诱导率最高为 90.01%， 是浓度过高，对外植体叶片的伤害较大，后期外植体很容易褐化，从而降低了毛 状根的诱导率。1/2MS 液体培养基较有利于北玄参毛状根的生长，在培养基中鲜 -I- 重增加倍数最多可达到 13.5 倍。毛状根 PCR 检测结果证明，Ri 质粒的 T-DNA 已整合到北玄参毛状根基因组中。 4 北玄参毛状根在 MS＋6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L 的培养基上可形成愈 伤组织，经过继代之后，愈伤组织出现大量的芽点，分化出芽继续转至无激素的 MS 培养基上，芽逐渐长大，切下后转至 1/2MS+IBA0.5mg/L 的培养基上培养 2 周左右，长出大量的根，移栽成活。 关键词：北玄参 组织培养 植株再生 发根农杆菌 毛状根 PCR 检测 -II- Abstract Scrphularia buergeriana belongs to Scrophularia ningpoensis Hemsl herb, which is an important traditional medicinal herbs. There has been a long history to use Scrphularia buergeriana replace buergeriana as the medicine in the northern of China. This study has used different methods to do the disinfection treatment on Scrphularia buergeriana seeds, obtain aseptic seedlings, do data statistics on the rate of seed germination and pollution rate, established the aseptic system of Scrphularia buergeriana. Using the stem segment, leafstalk, leaves as explants, based on orthogonal design, we have done some research on Scrphularia buergeriana callus, adventitious buds