吡格列酮对大鼠缺血再灌注诱导的内质网应激相关的心肌保护作用及机制探讨心血管内科专业论文.docxVIP

山西医科大学硕士学位论文  PAGE 39 吡格列酮对大鼠缺血再灌注诱导的内质网应激相关的心肌 保护作用及机制探讨 中文摘要 目的：制作大鼠缺血再灌注模型，观察吡格列酮预处理对大鼠心肌缺血再灌注 损伤时心肌细胞的凋亡、内质网凋亡途径相关蛋白caspase-12及JNK、p-JNK表达 的影响，术前30分钟腹腔注射JNK信号通路特异性抑制剂（SP600125）特异阻断 JNK信号通路，观察心肌细胞凋亡指数，caspase-12及JNK、p-JNK表达通路蛋白 表达，探讨吡格列酮通过JNK信号通路对内质网应激途径的影响及可能机制。 方法：Wistar大鼠（体重180 g～220 g，雄性）40只随机分为假手术组（Sham 组）、缺血再灌注组（I/R组）、吡格列酮（I/R+Pio）组及I/R+Pio+SP600125组 各10只，I/R+Pio+SP600125组及I/R+Pio组灌服吡格列酮10mg/(kg·d)，溶于2 ml 生理盐水中，共14 天；I/R组及Sham组，灌服生理盐水2ml/天，共14 天， I/R+Pio+SP600125 组 术 前 30 分 钟 腹 腔注射 JNK抑制剂 (SP600125 溶 于 DMSO)15mg/kg；制作大鼠MIRI模型：麻醉，气管插管、动物呼吸机辅助呼吸， 开胸腔，监测心电图，结扎冠状动脉前降支30min，再灌注2小时；缺血再灌注 模型制作成功后，处死大鼠、留取左室同一部位心肌组织，10％中性甲醛4℃固 定24 小时，常规脱水，石蜡包埋，切成厚5μm切片，用于心肌细胞凋亡检测及 免疫组化分析。采用TUNEL（末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺末端标记法） 染色法检测各组大鼠心肌细胞凋亡指数，采用免疫组织化学检测各组大鼠心肌 组织caspase-12表达变化，或将心肌组织置于液氮中保存，采用western Blot 法检测各组JNK、p-JNK的表达。 结果：1.I/R组心肌组织凋亡指数明显高于Sham组(P0．05)，给予吡格列酮预 处理后，大鼠心肌细胞凋亡较I/R组降低(P0．05)，加用JNK抑制剂（SP600125） 后心肌细胞凋亡指数进一步下降(P=0．05) ；2. I/R组caspase-12蛋白表达水平 明显高于Sham组(P0．05)，给予吡格列酮预处理后，大鼠caspase-12蛋白表达  水平降低(P0．05)，加用JNK抑制剂（SP600125）后caspase-12蛋白表达水平进 一步下降(P0．05) ；3. 与Sham组相比各组JNK蛋白的表达没有明显变化，但其 活化形式磷酸化JNK（p-JNK）表达变化显著，I/R组p-JNK表达明显高于Sham组 (P0．05)，给予吡格列酮预处理后，大鼠p-JNK表达较I/R组降低(P0．05)，加 用JNK抑制剂（SP600125）后p-JNK表达进一步下降(P0.05)。 结论：1.缺血再灌注损伤可激活JNK通路，诱导的过度ERS，增加ER凋亡信号介 导的细胞凋亡； 2.吡格列酮预处理可抑制ERS，进而抑制ER凋亡信号介导的细胞凋亡； 3.吡格列酮可抑制JNK信号通路的活化，JNK信号途径在吡格列酮预处理抑制ER 凋亡信号分子活化的机制中发挥重要作用。 关键词：心肌缺血再灌注损伤 JNK 内质网应激 吡格列酮  Pioglitazone protective effect and mechanism to the myocardium from endoplasmic reticulumstress-relatedinduces by Ischemia-reperfusion injury ABSTRACT 0bjective To observe influence of Pioglitazone on the changes of expression of JNK/ p-JNK and caspase-12 which is endoplasmic reticulum pathway of apoptosis related proteins in Ischemia reperfusion in rats.then blocked Specifically JNK signaling pathway by SP600125(JNK signaling pathway inhibitor ) , observe the above indicator changesdiscuss the myocardial protective effect of pioglitazone to the endoplasmic reticulum stress way through the JNK p