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西洋参增强蜂胶免疫功能实验研究 　　[摘要] 目的 观察西洋参对蜂胶增强小鼠免疫功能的协同作用。方法 实验设阴性对照组(蒸馏水)、蜂胶对照组（2.0g/kg体重）、蜂胶西洋参低、中、高三个剂量组（分别为0.5、1.0、2.0g/kg体重），相当于人体临床用量的7.5、15和30倍。结果 与阴性对照组比较，蜂胶西洋参中、高二个剂量组可明显提高小鼠血清溶血素水平、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力、二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应、小鼠NK细胞活性和ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化，差异均有显著性(PO.05)；而蜂胶对照组仅对二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应、ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化有明显的提高作用（PO.05）。结论西洋参可增强蜂胶的免疫功能提高作用。 　　[关键词] 蜂胶; 西洋参; 调节免疫; 协同作用; 实验研究 　　[中图分类号] R282.7[文献标识码] B[文章编号] 1005-0515（2011）-04-063-02 　　 　　蜂胶在我国市场出现巳有40多年历史，这是由于中华蜂不产蜂胶，所以从意大利蜂引进我国才产蜂胶。蜂胶在2005年作为中药材收录中国药典，目前国内产品多以单纯蜂胶制成的保健品为主，将蜂胶与西洋参配伍进行产品研发报导很少，本文将蜂胶配伍西洋参提取物观察了其对小鼠血清溶血素测定、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验、二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应试验(DTH)、NK细胞活性测定等实验影响，其结果期望为蜂胶配伍西洋参的产品研发提供实验依据，现将结果报告如下： 　　1 实验动物和检测条件：实验动物用昆明种小鼠由浙江省实验动物中心提供，清洁级，雌性，体重20±2g。饲料由浙江省实验动物中心提供，执行标准GB14924-1994。检测环境条件：温度91-93℃，相对湿度60-65%。动物于试验前在动物房环境中适应3天。 　　2 实验药物和剂量设计： 　　2.1 蜂胶:采自养蜂场的原蜂，由杭州天厨蜜源保健品有限公司提供。将蜂胶经乙醇提纯，经冷冻干燥制成纯蜂胶。纯蜂胶与淀粉按2：1混合，加入粉碎机中打成200目蜂胶粉，泠贮备用。 　　2.2 西洋参：购自吉林省宏久生物科技有限公司的西洋参提取物。 　　2.3 受试药的配制：将蜂胶粉与西洋参提取物以3：1的比例混合均匀，临用时用蒸馏水配制成5g/ml、2.5g/ml、1.25g/ml浓度。蜂胶对照组采用蜂胶粉，临用时用蒸馏水配制成5g/ml浓度。 　　2.4 实验设三个蜂胶西洋参剂量组、一个蜂胶对照组和一个蒸馏水对照组。低、中、高三个蜂胶西洋参组剂量分别为0.5、1.0、2.0g/kg体重(相当于人体临床拟用量的7.5、15和30倍)，蜂胶对照组剂量为蜂胶粉2.0g/kg体重，蒸馏水对照组每日灌胃蒸馏水20ml/kg体重。 　　3 实验方法： 　　3.1 小鼠血清溶血素测定(血凝法)：各组灌胃给样品，每天1次，连续30天。在试验第25天，每鼠腹腔注射0.2ml2%(V/V)压积绵羊红细胞(SRBC)悬液，进行免疫。5天后，取血离心，收集血清，用生理盐水将血清倍比稀释，37℃温箱孵育3小时，观察血球凝集程度，计算抗体积数。 　　3.2 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验(半体内法)：各组灌胃给样品，每天1次，连续30天。动物处死前40分钟，每鼠腹腔内注射20%(V/V)鸡红细胞悬液1ml，处死后再注入2ml生理盐水，取腹腔液滴片，37℃温箱孵育30分钟，固定染色，镜检，计数100个巨噬细胞，计算吞噬率及吞噬指数。 　　3.3 二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应试验(耳肿胀法)：各组灌胃给样品，每天1次，连续30天，在试验第25天，每鼠腹部涂50ul二硝基氟苯溶液(涂皮前24小时脱毛，面积约3cm×3cm)。5天后用二硝基氟苯溶液10ul涂抹于小鼠右耳进行攻击，24小时处死动物，剪下耳壳，用打孔器取下直径8mm的耳片，称重。 　　3.4 NK细胞活性测定（LDH测定法)：各组灌胃给样品，每天1次，连续30天。在试验第30天，每鼠无菌取脾，置于盛有适量无菌Hanks液的小平皿中，用镊子轻轻撕碎，制成单细胞悬液，200目筛网过滤，洗涤，计数，最后用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为5×±1O6个/ml。试验前24小时将YAC-l细胞(靶细胞)传代培养，应用前用Hanks液洗3次，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为l×lO5个/ml。取靶细胞和脾细胞悬液(效应细胞)各1OOul(效靶比50：1)，加入U型96孔培养板中，靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各10Oul，靶细胞最大释放孔加靶细胞和l%NP40各1Ooul。上述各项均设三个复孔，于37℃、5%CO2培养箱中培养4小时，离心，每孔吸取上清1OOul置平底96孔培养板中，同时加