苯乙醇胺a和沙丁胺醇单克隆抗体的制备及其酶联免疫吸附分析方法的建立-化学专业论文.docxVIP

Ⅰ 苯乙醇胺 A 和沙丁胺醇单克隆抗体的制备及其酶联免疫吸附分析方法的建立 中文摘要 苯乙醇胺 A 和沙丁胺醇单克隆抗体的制备及其酶联免疫 吸附分析方法的建立 中文摘要 随着社会的进步和生活水平的提高，人们对食品安全越来越重视，尤其关注食品 中存在的对人体健康产生不利影响的兽药残留。作为七大兽药残留中的一大类，β- 受体激动剂因其显著的营养再分配作用，常被非法用在畜牧业生产中。肉制品中残留 的 β-受体激动剂通过食物链可在人体内累积，危害消费者的身体健康。由 β-受体激 动剂引发的各类中毒事件也是时有发生，造成了恶劣的社会影响。因此，急需建立方 便快速的检测方法加强对这类 β-受体激动剂的监管。本文希望通过制备高灵敏度、高 特异性的苯乙醇胺 A 和沙丁胺醇单克隆抗体，建立相应的酶联免疫吸附分析方法 (ELISA)，用来有效的监测实际样品中的 β-受体激动剂残留。 苯乙醇胺 A（Phenylethanolamine A，PA）是近年来出现的一种新的 β-受体激动 剂，目前作为促生长剂被非法用于畜牧业中。本研究成功制备了针对苯乙醇胺 A 的 特异性单克隆抗体，在此基础上建立了高灵敏度、高特异性的用于检测动物组织样品 中苯乙醇胺 A 的 ELISA 法。首先对苯乙醇胺 A 的分子结构进行修饰，使之成为带氨 基的半抗原衍生物，再与载体蛋白即牛血清白蛋白（Bovine serum albumin, BSA）或 卵清白蛋白（Ovalbumin, OVA）偶联，形成免疫原以及包被原。其中以 PA-BSA 偶 联物为免疫原免疫小鼠，取免疫小鼠的脾细胞与小鼠的骨髄瘤细胞融合后获得了一株 灵敏度较高的单克隆抗体细胞株。以单克隆抗体为基础建立了检测苯乙醇胺 A 的间 接竞争 ELISA 法，并对方法的灵敏度，特异性，精确度以及准确性进行了表征。在 最优条件下，基于同源性包被抗原/抗体测定苯乙醇胺 A 的 ELISA 法的 IC50 为 0.16 ng/mL，检出限（LOD）为 0.011 ng/mL，比已有文献的灵敏度高 1.3-17 倍。与其它 十四种 β-受体激动剂的交叉反应低于 0.59%，证明所建立的 ELISA 不仅灵敏度高， 而且特异性强。选择猪肉以及猪肝作为实际样品进行样品加标回收实验，回收率在 91.40-105.51%，批内变异系数(Coefficients of variation, CV)为 1.56–9.92% (n=3)，批间 CV ??? 2.02-11.71% (n=3)。用高效液相色谱串联质谱（LC–MS/MS）对 ELISA 进行验 Ⅱ 中文摘要 苯乙醇胺 A 和沙丁胺醇单克隆抗体的制备及其酶联免疫吸附分析方法的建立 证，发现两种方法结果的相关系数为 0.98，相关性良好。本文所建立的 ELISA 法具 有灵敏度高、特异性强、简便、准确可靠的特点，可用于实际样品中苯乙醇胺 A 的 检测。 沙丁胺醇是继克伦特罗之后另一种被普遍滥用的 β-受体激动剂。本研究通过丁二 酸酐法合成沙丁胺醇衍生物，使之带有活性基团羧基，再与载体蛋白偶联，制成免疫 原和包被原。对免疫小鼠抗血清进行效价测定，发现血清滴度能达到 104 以上，基于 抗血清建立的 ELISA 法的 IC50 为 6.91 ng/mL，LOD 值为 0.19 ng/mL。希望在此良好 的基础上，后期能获得稳定分泌特异性单克隆抗体的细胞株。 关键词：酶联免疫吸附分析法，苯乙醇胺 A，沙丁胺醇，单克隆抗体 作 者：姜丹妮 指导老师：邓安平 教授  苯乙醇胺 A 和沙丁胺醇单克隆抗体的制备及其酶联免疫吸附分析方法的建立 英文摘要 Production of monoclonal antibodies and the development of an indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ic-ELISA) for sensitive and specific detection of phenylethanolamine A and salbutamol Abstract With the social development and the rising of the living standard, people pay more attention to food quality, especially to the possible adverse effects of the residues of veterinary drugs in foodstuffs on human health. Recently, β-agonists, one kind of the veterin