趋化因子受体CXCR2在结直肠癌组织中表达及其临床意义.docVIP

趋化因子受体CXCR2在结直肠癌组织中表达及其临床意义 　　[摘要] 目的 探讨结直肠癌患者组织中趋化因子受体CXCR2的表达水平及其对临床上结直肠癌侵袭、转移等预后的影响。 方法 以46例大肠癌、20例结肠息肉或腺瘤、30例正常结肠黏膜为研究对象，采用免疫组织化学SP法及RT-PCR法检测组织中CXCR2的蛋白质定量及mRNA半定量水平，并根据临床病理特征进行对照分析。 结果 CXCR2表达水平（蛋白水平及mRNA水平）在结直肠癌组织与大肠良性肿瘤组织中差异有统计学意义（P0.05）；CXCR2表达水平在肠癌组织与正常结肠组织中差异有统计学意义（P0.05）；CXCR2表达水平在肠癌淋巴结转移患者与未转移患者中差异有统计学意义（P0.05）；不同分化程度肠癌CXCR2表达水平差异有统计学意义（P0.05）；结直肠癌中CXCR2的表达与临床分期相关。 结论 结直肠癌细胞浸润、转移过程中可能有趋化因子受体CXCR2的参与，临床上对肠癌组织CXCR2的检测对其侵袭、转移生物学行为的预测具有重要的意义。 　　[关键词] 趋化因子受体；CXCR2；结直肠肿瘤；侵袭；转移 　　[中图分类号] R735.3 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）12（a）-0009-05 　　结直肠癌是我国常见的恶性肿瘤之一，其发病率呈上升趋势。由于结直肠癌手术时多已存在微转移灶，故结肠癌患者行根治术后，仍有25%～30%的患者出现复发。许多学者正在寻找一些客观生物指标，用于结直肠癌的早期诊断及预测侵袭、转移及复发情况。目前趋化因子受体CXCR2与肿瘤的侵袭生长及转移关系的研究正成为一个新的热点。CXCR2是趋化因子CXC亚家族的受体，与其特异性配体相作用可触发细胞内多种信号传导，从而介导细胞参与各种生理和病理过程[1]。在某些肿瘤细胞中CXCR2可高表达，可在肿瘤的转移和侵袭中发挥作用。本研究应用免疫组织化学SP法及RT-PCR方法检测结直肠良性肿瘤（息肉和腺瘤）、结直肠癌组织标本中CXCR2的蛋白质及mRNA水平的表达。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　选择2012年9月～2013年9月于本院行手术治疗的结直肠癌患者，完整病例资料且符合实验条件入组病例共46例，其中男性27例，女性19例，平均年龄50.1岁。手术切除标本经病理科按流程标准处理，有经验病理科医师HE染色于镜下证实。同时取结直肠良性肿瘤（息肉或腺瘤）对照患者共20例，其中男性13例，女性 7例，平均年龄45.5岁。所有患者术前均未接受过其他相关治疗。 　　1.2 试剂、仪器 　　1.2.1 免疫组织化学相关试剂 Elivision plus试剂盒（KIT-9901）购自福州迈新；鼠抗人CXCR2多克隆抗体（SC-683）：浓缩型，工作浓度为1∶200，购自SANTA CRUZ生物公司。 　　1.2.2 RT-PCR方法相关试剂 CXCR2引物序列（上游引物：5′-CAGCGACCCAGTCAG GATTTA-3′，5′-ACCAG CATCACGAGGGAGTTT-3′，产物251 bp）及内参引物序列（β-actin上游引物：5′-ATCATGTTTGAGACCTTC AACA-3′，下游引物：5′-CATCTCTTGCTCGAAGTCCA-3′，产物318 bp）由北京三博远志公司合成。ReverAid First Strand cDNA Synthesis Kit（K1622）购自Fermentas公司，Trizol、DEPC购自Invitrigeon公司，主要仪器：PCR仪（美国PE2400），凝胶电泳仪（DYY-Ⅲ8B），高速冷冻离心机（TGL-16G），凝胶成像系统。 　　1.3 方法 　　1.3.1 标本收集 于临床手术中下标本后30 min内，取新鲜相关组织置于-80℃冰箱中冻存备用。 　　1.3.2 反转录聚合酶链反应检测 充分匀浆鲜冻手术标本组织并提取总RNA，取总RNA 3 μg，加入随机引物oligo（dT）18 1 μl，70℃共孵育5 min，依次加入2.5 μl 10×reaction buffer、1 μl Rnasin（20 U/μl）、10 mmol/L dNTPs 2 μl，37℃孵育5 min，添加1 μl M-MuLV反转录酶（200 U/μl），42℃反应60 min，合成第一链cDNA，70℃孵育10 min，终止反应；以此cDNA模板进行下一步实验，PCR体系成分（总体积至25 μl）：1 μl Taq合酶（1 U/μl），1 U 10 μmol/L的上游引物、1 U 10 μmol/L的下游引物、2.5 μl 10×PCR缓冲液、0.5 μl 10 mmol/L dNTP