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超声法提取对金针菇多糖抗氧化活性影响 　　摘要：本试验通过比较超声法提取与热水法提取的金针菇多糖的体外抗氧化活性，研究超声波提取对金针菇多糖抗氧化活性的影响。结果表明：在0.125-2.000mg/mL范围内，随金针菇多糖浓度的增加，其抗氧化能力增加；金针菇多糖对超氧阴离子的清除能力较强，对DPPH自由基的清除能力次之，对羟自由基的清除能力和相对还原力均较低。热水法与超声法提取的金针菇多糖抗氧化能力基本一致，即超声提取对金针菇多糖抗氧化活性几乎没有影响。 　　关键词：超声波提取；金针菇；多糖；抗氧化 　　中图分类号：S567.3+9 　　文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2016）01-0054-04 　　金针菇（Flammulina velutipes）属真菌分类中的担子菌亚门伞菌目口蘑科小火焰菌属的真菌，又名冬菇、朴蕈等。金针菇多糖（FVP）是金针菇中重要的活性物质，具有免疫调节、抗肿瘤、抗病毒和增强机体免疫力等功能。传统的水提醇沉法，提取时间长，提取率低，而超声波对植物细胞壁的破碎作用可提高提取得率，缩短提取时间。采用超声联合超微粉碎提取金针菇多糖时，其提取效率由热水提取的9%提高为20.5%。目前关于超声波提取对多糖结构和活性等方面的研究较少，王博等研究超声波强化提取对茯苓水溶性多糖结构的影响时，发现超声波提取会影响多糖的分子链结构，但不会影响多糖的单糖组成和单糖结构。廖建民等在研究超声波提取海带多糖时，发现超声波提取的多糖抑肿瘤效果与水提法无显著差异。本研究以Vc抗氧化能力做对照，通过比较热水提取与超声波提取对金针菇多糖的体外抗氧化活性，包括相对还原力以及对DPPH.、超氧阴离子、羟基自由基的清除作用的影响，研究超声波提取对金针菇多糖抗氧化性的影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 主要材料与仪器 　　金针菇粉（100目），实验室自制，含水量5%。DPPH，购于Sigma公司，其余均为分析纯。 　　主要实验仪器：UV-6100紫外分光光度计：上海元析仪器有限公司；电子天平：奥豪斯仪器（上海）有限公司；XO-SMlOO超声波微波组合反应系统：南京先欧仪器制造有限公司；LXJ-IIB高速离心机：上海安亭科学仪器厂；DHG电热恒温干燥箱：上海精宏实验设备有限公司；SY-2000旋转蒸发仪：上海亚荣生化仪器厂。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 金针菇多糖热水、超声波提取工艺 将金针菇粉按照优化后的提取工艺，即1∶25的料液比，加入热水9℃提取4h，或380W超声25min后，4500r/min离心20min，取上清液浓缩3倍，80%乙醇醇沉，离心，将沉淀物冻干得到两种不同提取方法的金针菇粗多糖，水提与超声波提取的提取率分别为9%、20%，采用苯酚一硫酸法测多糖含量。 　　将热水与超声法提取的金针菇多糖分别配成0.125、0.500、1.000、1.500、2.000mg/mL的多糖溶液，3000xg离心10min，取上清液备用。 　　1.2.2 金针菇多糖相对还原力测定参照Ovai-ZU[7]的方法。分别取多糖样品1.0mL于试管中，加入pH6.6的0.2mol/L磷酸盐缓冲液、1%的K3[Fe（CN）6]溶液各2.5mL，50℃水浴保持20min。冷却，再加入10%三氯乙酸2.5mL混匀，3000r/min离心10min。取上清液2.5mL，加入2.5mL水和0.1% FeCl3溶液0.5mL，常温反应10min，测定A700nm，测定3次，取平均值。并以VC为对照比较两种方法提取的金针菇多糖的相对还原力。 　　1.2.3 金针菇多糖清除1，1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基（DPPH.）的测定 DPPH?清除率（I1）按公式（1）计算，其中A1为1.0mL多糖溶液和4.0mL6.5×10-5mol/L DPPH?、A2为1.0mL50%乙醇溶液和4.0mL不同浓度的多糖液、A3为1.0mL 50%乙醇溶液和4.0mL 6.5×10-5mol/L DPPH?分别反应30min后在517nm处测得的吸光值；测定3次，取平均值。并以抗坏血酸为对照，比较两种方法提取金针菇多糖对DPPH?的清除率。 　　1.2.4 金针菇多糖对超氧阴离子的清除能力测定邻苯三酚自氧化速率的测定：将试管中加入4.5mL的50mmol/L Tris-HCl缓冲液（pH值8.2）和4.2mL蒸馏水，25℃水浴20min，取出后迅速加入0.3mL的3mmol/L邻苯三酚溶液（溶剂为10mmol/L HCl，提前预热至25℃），混匀后于325nm下每隔30s测一次吸光值，反应4.5min结束。空白组为10mmol/L的HCl。一定线性范围内，计算每分钟吸光度的增加值。 　　样品自氧化速率的测定：取不同浓度的多