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重筛野生黑木耳废渣中木质素过氧化物酶研究 　　摘要：筛选野生黑木耳废渣中产木质素过氧化物酶的菌株，对存在的漆酶、锰过氧化物酶和木质素过氧化物酶的活力进行测定，并对3种酶的最适温度和最适pH进行考察。结果表明，在33株野生黑木耳菌株中，得到2株产木质素过氧化物酶菌株，废渣中3种酶的平均酶活力分别为54.3、37 200、6.7 U/L；3种酶的最适温度为28～32 ℃，最适pH为6.2～7.0。废渣中3种酶活力差别较大，锰过氧化物酶活力最强，在降解木质素上起主要作用，木质素过氧化物酶活力最小，作用差。 　　关键词：野生黑木耳废渣；漆酶；锰过氧化物酶；木质素过氧化物酶；酶活 　　中图分类号：Q554.9 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）17-4510-04 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.17.039 　　Abstract： Bacterial strains which could produce lignin peroxidase were rescreened from the offscum of wild black fungus. Laccase，manganese peroxidase and lignin peroxidase from fungus were determined，optimal temperature and pH were analysed. The results showed that it got two strains which would produce lignin peroxidase from the 33 bacterial strains of wild black fungus，the average activity of three enzymes were 54.3 U/L，37 200 U/L and 6.7 U/L. Optimum temperature and pH of three enzymes were 28 to 32 ℃，6.2 to 7.0. The activity of three enzymes varied greatly. Manganese peroxidase activity was the strongest，played a major role in the degradation of lignin， lignin peroxidase activity was small，had a weak effect. 　　Key words： the offscum of wild black fungus； laccase； manganese peroxidase； lignin peroxidase； activity 　　黑木耳是东北大小兴安岭林区一种常见的食用菌，具有很高的营养价值和经济价值。目前，野生黑木耳的产量逐年下降，远远不能满足市场需求，现在市面上的黑木耳多以人工栽培为主。在黑木耳的栽培过程中，需要用到大量木屑，并且在栽培结束后会产生大量废渣，人们一直在寻找代料栽培，能够替代木屑的碳源物质，以减少对林业资源的浪费和降低黑木耳栽培的成本，并寻找更好的利用食用菌废渣中多种有效成分的方法，减轻食用菌栽培对社会、环境等带来的诸多问题。黑木耳废渣中含有蛋白酶、纤维素酶、半纤维素酶、木质素降解酶等在内的多种酶，这些酶都是附加值较高的一类物质，研究者已经开始对食用菌废渣的再处理利用进行研究。 　　木质素降解酶是一类由白腐菌分泌用于降解植物木质素为其提供碳源的酶类，主要包括漆酶、锰过氧化物酶和木质素过氧化物酶3种[1]，多数微生物只能产生上述酶类的一种或两种，只有少数菌类能产生3种木质素降解酶，故3种木质素降解酶不是微生物分解木质素所必须的，但有研究表明3种木质素降解酶在分解木质素过程中各有侧重，一般拥有酶种类多的菌种分解木质素能力更强[2，3]。黑木耳多产生漆酶和锰过氧化物酶，而产木质素过氧化物酶较少见。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 菌种与废渣 野生黑木耳菌种37株，标号为TH1～TH37，均采自黑龙江省伊春市桃山林业局。 　　黑木耳废渣试验前保存于-80 ℃低温冰箱。 　　1.1.2 试剂与仪器 Azure B购自美国Sigma公司，2，2-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐（ABTS）购自美国Amresco公司，其他试剂均为国产分析纯。试验所用仪器有HH-601A恒温水浴锅、SIGMA 2-16PK冷冻高速离心机、752型紫外分光光度计、DNP-9022-1型恒温培养箱、CLG-3