采用核磁共振液相色谱质谱异相关谱方法开展药用植物草棉活性提取物中多组分同步结构分析研究.docVIP

采用核磁共振液相色谱质谱异相关谱方法开展药用植物草棉活性提取物中多组分同步结构分析研究 　　摘 要 基于不完全分离分析策略，建立了NMR/LC-MS 异相关谱（NMR/LC-MS HCS）方法对系列混合物样品的LC-MS和NMR谱数据的整合分析，发掘混合物图谱中来自同一组分的LC-MS和NMR谱数据间的内在相关性。以新疆维吾尔民族药用植物草棉（Gossypium herbaceam L.）花瓣的乙醇提取物（AB-8-2）为研究对象，以多通道组合闪式色谱技术为分离手段，不完全分离并获取了组分含量呈连续动态变化的系列混合物，运用NMR/LC-MS HCS方法对提取物中的黄酮苷类成分进行了同步结构分析研究。由于随组分浓度动态变化的多种谱学信号强度间具有强的正相关性，通过 NMR/LC-MS HCS图可以获得系列提取物中同一组分的互补性的LC-MS 和 ??1H NMR 谱数据，包括保留时间（Rt）、质荷比 (m/z) 和化学位移值 (δ)等关键数据。以已解析的关键谱学信号为线索，引入LC-MS/MS谱和二维NMR谱进行综合分析， 成功地从AB-8-2中鉴定出12个黄酮醇苷类化合物，其中还包括2组共流出的同分异构体。结果表明： 通过该新型分析方法可以在离线的情况下通过“数学联用的方式”实现与在线LC-NMR-MS联用技术相似的分析功能，这种新型谱学分析方法可以简化复杂混合物的分离分析过程，实现结构复杂成分以及多组分无需完全分离的快速同步结构鉴定；尤其对于常规分离条件下难以获得单体的微量成分或极性相近组分群显示出独特的解析能力。 　　关键词 核磁共振/液相色谱-质谱异相关谱; 混合物不完全分离; 多组分同步结构鉴定; 草棉植物; 黄酮苷类 　　 2010-11-21收稿；2011-01-05接受 　　本文系国家自然科学基金(No. 资助项目 　　?? E-mail: zeper@imm.ac.cn 　　1 引 言 　　质谱和核磁共振谱是鉴定化合物结构必需的两种谱学方法。随着两者联用技术LC-NMR-MS［1～3］的出现与发展，显著加快了天然产物及药用植物混合物成分的分离与结构鉴定的进程。它具有先分离后分析的特点。目前，由于NMR自身检测灵敏度的限制，导致其与LC技术联用时还存在一系列的兼容问题［4～6］，且该仪器较昂贵，使用成本较高。 　　除了上述联用技术之外，广义二维相关谱技术［7］的出现为数据的综合分析提供了新思路。利用化学计量学中相关性的原理对混合物体系的同种或不同种谱学数据进行关联分析，从而获得互补性的谱学信息用于分析鉴定。Hua等［8］采用二维红外相关谱技术对中药贝母的产地进行区别分析；李钊等［9］采用基于核磁共振的统计全相关谱（STOCSY）对肾脏中代谢物质系列??1H高分辨魔角旋转NMR谱数据进行归属。Corcoran等［10］采用统计异相关谱 (SHY)，对复杂生物混合物样品的MS谱与??1H NMR 谱［10］、CE谱数据［11］进行分析，寻找潜在的生物标志物。广义二维相关谱技术在复杂混合体系的分析中，运用数学分离代替化学分离，具有不分离分析的特点，这对于混合物体系或色谱共流成分的分析鉴定发挥了重要作用。本研究组曾依据广义二维相关谱技术的原理，提出了基于不完全分离的分析策略，建立了LC-MS与??1H NMR的平行动态谱（NMR/LC-MS parallel dynamic spectroscopy， NMR/LC-MS PDS）［12］。目前，该方法已成功应用于常用中药连翘水提物的分析［13］。 　　本研究在NMR/LC-MS PDS 谱的基础上进行了新的研究和探索，使用MATLAB 软件编写及优化数据处理程序，获取系列混合物组分的 LC-MS 和 ??1H NMR 谱信号强度间的相关系数，并设定合适的相关系数截取值来产生NMR/LC-MS异相关谱（NMR/LC-MS hetero-correlation spectroscopy，NMR/LC-MS HCS）。混合物中同一组分两种信号间的相关称为自相关，两个不同组分信号间的相关称为伪相关。由于同一组分的两种信号随组分的浓度变化而具有相似的强度变化趋势，因此自相关系数要高于伪相关系数，通过设定相关系数截取值可将两者加以区分。通过 NMR/LC-MS HCS谱的可视化结果，可以更直观地获得混合物中属于同一组分的质荷比（m/z）和化学位移值（δ）的相关性信息，从而进一步获得有关分子离子、碎片离子、化学位移值和偶合裂分等结构信息。NMR/LC-MS HCS方法的原理及实验流程见图解1。 　　第6期代冬梅等： 采用核磁共振/液相色谱-质谱异相关谱方法开展药用植物草棉活性提取物中多组分的同步结构分析研究 　　图解1 基于不完全分离策略