阿司匹林对人宫颈癌Hela细胞BCL―6mRNA表达影响.docVIP

阿司匹林对人宫颈癌Hela细胞BCL―6mRNA表达影响 　　【摘要】目的：研究阿司匹林对人宫颈癌Hela细胞增殖及BCL-6 mRNA 表达量的影响。方法：不同剂量的阿司匹林干预人宫颈癌 Hela细胞24h后，用MTS法观察其对人宫颈癌 Hela细胞增殖状态的影响及采用逆转录-聚合酶链反应（qRT-PCR） 检测阿司匹林作用后 Hela 细胞 BCL-6 mRNA 量的变化。结果：阿司匹林能抑制Hela细胞增殖及促进细胞中 BCL-6 mRNA 的表达，且促进强度随阿司匹林的浓度的增加而增加。结论：阿司匹林能够抑制人宫颈癌Hela细胞的生长，并从 mRNA 水平促进 BCL-6 蛋白的表达。 　　【关键词】 阿司匹林；人宫颈癌 Hela 细胞；BCL-6 　　【中图分类号】R73-36+1【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2017）05-0049-03 　　阿司匹林属于非甾体抗炎药的代表药，是临床上常用的解热镇痛药。研究发现长期低剂量服用阿司匹林具有预防肿瘤的作用[1]，对肠癌细胞系、乳腺癌、胰岛瘤NIT-1细胞、宫颈癌Hela细胞等均有抑制作用[2-4]。宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，其全球发病率位居女性恶性肿瘤中第2位[5]。其发病是一个多因素、多步骤级连的过程[6]，发病机制尚未完全阐明。BCL-6基因（B cell lymphoma 6，简称 BCL-6）是Ye等[7]在 1993年研究非霍奇金淋巴瘤免疫基因图谱时发现的一种原癌基因。在生理条件下，BCL-6 主要表达于生发中心 B 细胞和 CD4T 细胞，调节B细胞活化及分化相关基因如 blimp-1、CD4等[8]、细胞周期调控基因如p27kip1、cyclinD2、炎症有关的趋化因子基因如MIP-1a 和 IP-10[9]的表达。大量研究发现[10-12]发现BCL-6 在多种肿瘤中表达量增加，并且与肿瘤的增殖、侵袭和迁移密切相关。由于BCL-6与肿瘤密切相关，所以我们推测阿司匹林可能通过促进BCL-6的转录表达来抑制宫颈癌Hela细胞的增殖。本研究通过观察阿司匹林对人宫颈癌 Hela 细胞 BCL-6 mRNA 表达的影响来探究宫颈癌的发病机制。 　　1仪器与材料 　　11细胞人宫颈癌 Hela 细胞株，购于武汉博士德生物工程有限公司。 　　12试剂和药品RPMI-1640培养基（Gibco公司）；青霉素-链霉素混合溶液（100×双抗，Gibco公司）；胎牛血清 （FBS，Gibco公司）；二甲基亚砜 （DMSO，Sigma公司）； 0 02% EDTA/0 25% 胰蛋白酶（Gibco公司）；Trizol （Invitrogen公司）；CellTiter 96 AQueous One Solution Cell Proliferation Assay（promega公司）；GoTaq 2-Step RT-qPCR System （Promaga公司）；其它试剂均为国产分析纯。 　　13仪器二氧化碳培养箱（美国thermo公司）；BX51倒置显微镜（日本奥林巴斯公司）； NanoDrop 2000超微量分光光度计（美国赛默飞世尔科技公司）；T100 Thermal Cycler PCR仪（美国Bio-Rad公司）；Eco荧光定量PCR系统（美国Illumina公司）。 　　14药物Aspirin（货号：A2093，SIGMA公司）。 　　2方法 　　21阿司匹林溶液的配制与人宫颈癌 Hela 细胞培养 　　211阿司匹林溶液的配制将40mL完全培养基放至 50mL的离心管中备用；再用电子天平准确称取72064g的阿司匹林粉末（分子量为 18016），溶于准备好的 40mL完全血清培养基中，用震荡混匀器充震荡使其完全溶解，再将pH值调至 71～72，即得 1mol/L 的阿司匹林母液，随后转移至超净台用 022μm 的微孔过滤器过滤除菌，分装至小离心管中，置于-20℃冰箱保存，使用时予完全培养基稀释至不同浓度的阿司匹林25、50、100、200mmol/L。 　　212人宫颈癌 Hela 细胞培养人宫颈癌 Hela细胞于37℃、饱和湿度、 5% CO2条件下贴壁培养，经025%的胰蛋白酶常规消化后按一定量接种至RPMI-1640培养基（含10% FBS，1%双抗）中吹散均匀，移入新细胞培养皿，于培养箱中继续培养，每3～4d传代1次，每日于倒置显微镜下观察细胞生长状况。 　　22MTS法检测不同浓度阿司匹林对HeLa细胞的生长抑制率取处于对数生长期的人宫颈癌 Hela细胞经025%的胰蛋白酶常规消化后按按1×104个/孔接种于96孔板内，每孔200μL，接种完毕后，将板置于37℃，含5% CO2的培养箱中贴壁过夜，