人皮肤成纤维细胞培养和鉴定.PDF

维普资讯 中国危重病急救医学2005年 2月第 17卷第 2期 ChinCritCareMed，Feb．2005，Vo1．17，No．2 · 89 · · 论 著 · 人皮肤成纤维细胞的培养和鉴定 李海红 周岗 付小兵 屈振亮 利、同柱 顾绍峰 【摘要】 目的 探索和建立人皮肤成纤维细胞体外分离、培养及鉴定的技术方法。方法 通过酶消化法 分离人皮肤外分泌汗腺 ，在外分泌汗腺生长的同时，成纤维细胞也在生长；用质量分数为0．25 的胰酶和 0．02 的乙二胺 四乙酸 (EDTA)消化分离汗腺细胞和成纤维细胞 ；以Dulbecco改 良的 Eagle培养液 (DMEM)为基础培养基，添加胎牛血清 (体积分数 1O )、青霉素(100ku／L)和链霉素(100mg／L)，置37_C、 体积分数为5 CO 、95％空气、饱和湿度条件下培养。倒置相差显微镜和苏木素一伊红染色 ，观察成纤维细胞 形态，并对培养细胞行波形蛋白免疫组化及染色体鉴定。结果 分离的成纤维细胞可在体外快速贴壁生长、 增殖，波形蛋白免疫组化染色为阳性，染色体分析为46条。结论 该方法所获得的皮肤成纤维细胞可在体外 稳定培养，为在细胞水平上研究伤 口愈合的机制提供了充足、可靠的靶细胞。 【关键词】 成纤维细胞； 细胞培养； 细胞分离 ； 鉴定 Culltureandidentificationofhumanskinfibroblasts LIHai—hong ，ZⅣo Gang，F iao—bing，Q Zhen—Hang。SUN Tong—zhu，GUShao一{e,ng． KeyResearchLaboratoryofWoundRepairo{PLA，Burn Institute，304thClinicalDepartmentof GeneralHospitalo_，PLA，Beijingj00037,-China(LIHai—hongis workingonTaiheHospitalofYunyangMedicalCollege，Sh an442000，Hubei，China) 【Abstract】 Objective Toexplorethemethodofisolation，cultivation，andidentificationofhuman skin fibroblastsin vitro．Methods By digestinghuman skinwith collagenasetype Ⅱ to isolatehuman eccrinesweatglands．Thefibroblastsgrew alongwiththegrowthofeccrinesweatglandcells，andtheywere separatedbydigestingwith0．25 trypsinand0．02％ethylenediaminetetraaceticacdi (EDTA)．Dulbecco’s modifiedEagle’smedium (DMEM )wasthebasicculturemedium ．being supplementedwith fetalbovine serum(10 )，penicillin(100kU／L)，andstreptomycin(100mg／L)．Fibroblastswereincubatedat37Cina humidifiedatmosphereof5 CO2and95％ airintheincubator．Cellularmorphologieswereobservedby invertedphasecontrastmicroscopyandhematoxylin—eosinstaining，andtheculturedcellsweredientifiedby vimentin immunostaining and chromosome analysis．Results The isolated fibroblastscould grow and proliferateinvitro，andimmunostainingofvimentinwaspositi