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黑木耳中水溶性多糖提取条件研究 　　摘 要：目的：优化黑木耳中多糖的提取工艺条件，明确黑木耳多糖的抑菌活性。方法：采用单因素试验和正交试验，研究提取时的液料比、提取时间和提取温度对黑木耳多糖提取率的影响。结果：提取温度是影响黑木耳多糖提取率的最关键因素，其次是提取时间，液料比对多糖提取率的影响最小。结论：黑木耳多糖最佳提取条件为液料比30，提取时间4h，提取温度95℃。在最佳提取条件下，黑木耳多糖提取率为5.16%。 　　关键词：黑木耳；多糖；提取条件；正交试验 　　中图分类号 S646.6 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2018）11-0009-03 　　黑木耳[Auricularia auricular（L.ex Hook.） Underwrd.]又称木耳，属担子菌纲（Basidiomycetes），木耳目Auriculariales，木耳科Auriculariaceae[1]。中国是黑木耳的主要生产国，产区主要分布在吉林、黑龙江、辽宁、内蒙古、广西、云南、贵州、四川、湖北、陕西等地，其中黑龙江省牡丹江地区海林市是中国最大的黑木耳基地，产出的黑木耳品质在全国名列前茅[2]。目前国内黑木耳有9个品种[3]，黑龙江地区有其中的8个品种。黑木耳多糖具有抗血栓[4]、抗凝血[5]、增强机体免疫功能[6]等多种有益于人体健康的功效，其含有丰富的甘露聚糖、葡萄糖、甘露糖、木糖、葡萄糖醛酸等碳水化合物[7，8]，是菌中之佳品。本文利用正交试验法，对黑木耳多糖的提取条件的优化及粗多糖含量的测定进行了研究。 　　1 材料、试剂与仪器 　　1.1 材料和试剂 供试黑木耳，黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院食用菌研究室选育。将黑木耳用粉碎机粉成粉末状态，过60目筛，保存备用。葡萄糖、正丁醇、氯仿、无水乙醇、浓硫酸、苯酚、活性炭等化学试剂均为分析纯。 　　1.2 仪器 V-1000型可见分光光度计（翱世仪器（上海）有限公司）、TDZ5-WS低速大容量离心机（湘仪离心机仪器有限公司）、DK-8D三湿三控水槽（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）、AR153CN电子天平（奥豪斯仪器（常州）有限公司）、DGG-9140A型电热恒温鼓风干燥箱（上海森信实验仪器有限公司）、SZC-101智能型自动提取索氏提取器（上海纤检仪器有限公司）等。 　　2 实验方法 　　2.1 标准曲线的绘制 精密称取105℃下烘干至恒重的葡萄糖10mg，用蒸馏水溶解定容至100mL。精密吸取葡萄糖溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL于10mL具塞试管内，补充蒸馏水至2.0mL，摇匀，另取1支具塞试管加入2.0mL蒸馏水作为对照。各试管加入6%苯酚溶液1.0 mL，摇匀，迅速加入浓硫酸5.0mL，混合均匀，室温放置25min，于490nm波长处测定吸光度。 　　2.2 黑木耳多糖的提取及纯化 将黑木耳粉装入滤纸包中，用SZC-101智能型自动提取索氏提取器除去脂肪，于40℃烘箱中烘干。称取黑木耳粉1.00g，以0.3mol/L的NaOH溶液作为溶剂，采用不同的液料比、不同温度、不同提取时间对黑木耳样品进行多糖的提取。完成浸提后于3000r/min离心10min，用5.0mol/L的盐酸调节上清液 pH至中性，滤液95℃下水浴浓缩至10mL，加入3倍体积的95%乙醇（30mL），静置过夜。3000r/min离心10min，收集沉淀，加50mL水复溶后，取出20mL向其中加入5 mL sevage试剂（氯仿∶正丁醇=4∶1），振荡后静置分离，直到没有乳白色变性蛋白析出为止，收集分液漏斗中的上清液，向上清液中加入足量的活性炭，摇匀，恒温30min以上，过滤；取0.05mL过滤液加蒸馏水至2mL，于490nm下进行分光光度的测定。 　　2.3 多糖含量测定 黑木耳多糖含量测定采用苯酚-硫酸显色法[9]，具体操作同标准曲线。 　　2.4 单因素试验设计 精确称取样品1.00g置于100mL三角瓶中，考察液料比?Χ嗵堑寐实挠跋欤?液料比分别为10、20、30、40、50，提取温度为85℃，提取时间为2h，提取1次，3次重复；考察提取时间对多糖得率的影响，提取时间分别为1h、2h、3h、4h、5h，液料比为30，提取温度为85℃，提取1次，3次重复；考察提取温度对多糖得率的影响，提取温度分别为55℃、65℃、75℃、85℃、95℃，液料比为30，提取时间为2h，提取1次，3次重复，按照2.2方法操作。 　　2.5 正交试验设计 拟采用正交试验设计优化黑木耳多糖提取条件，根据单因素的试验结果，选择液料比、提取时间、提取温度为影响因素，进行3因素3水平的正交试验设计，见表1。 　　3 结果与分析 　　3.1 标准曲线的制作 按照2.1进行