鳞盖红菇菌丝体多糖对H22荷瘤小鼠Bcl2和P53表达影响.docVIP

鳞盖红菇菌丝体多糖对H22荷瘤小鼠Bcl2和P53表达影响 　　用鳞盖红菇（??Russula lepida??）菌丝体多糖连续灌胃H22荷瘤小鼠10 d。与阴性对照组相比，多糖组的瘤重降低，Bcl-2和突变型P53的表达下调，表明鳞盖红菇菌丝体多糖对H22荷瘤鼠有抑瘤作用，可以抑制H22肝癌细胞的增殖。 　　鳞盖红菇； 多糖； H22荷瘤小鼠 　　 　　目前，食药用真菌多糖作为一种重要的生物效应调节剂已广泛应用于免疫缺陷性疾病、自身免疫疾病和肿瘤等的临床治疗，其中抗肿瘤作用是药用真菌多糖最为重要的生理功能［1］。鳞盖红菇??（Russula lepida)?? 属于伞菌目(Agaricaceae)、红菇科(Russulaceae)，其子实体中蛋白、多糖、氨基酸、微量元素等含量与正红菇（??R. vinosa??）相近［2］。已有实验证明鳞盖红菇菌丝体多糖能提高正常小鼠巨噬细胞的吞噬功能，促进IL-2、 IgG 的分泌，提高小鼠的免疫功能 ［3］，本实验探讨了鳞盖红菇菌丝体多糖对H22荷瘤小鼠的抑瘤效果，以期为更好的开发和利用鳞盖红菇资源提供参考。?? 　　1 材料与方法 　　1.1材料 　　1.1.1菌种 　　鳞盖红菇（??R. lepida??)菌种购自中国林业微生物保藏管理中心。?? 　　1.1.2实验动物 　　H22腹水型瘤源鼠，购自黑龙江肿瘤研究所。?? 　　昆明种小鼠30只，雌雄各半，体重20~??24 g，由佳木斯大学实验动物中心提供（许可证号：黑动字）。?? 　　1.1.3主要试剂 　　P53多抗原液、Bcl-2单抗原液、PBS缓冲液、P53阳性对照片、Bcl-2阳性对照片，枸橼酸盐缓冲液均购自武汉博士德生物工程有限公司。?? 　　1.2方法 　　1.2.1鳞盖红菇菌丝体多糖的制备 　　鳞盖红菇经深层发酵、过滤、离心得菌丝体。将菌丝体干燥，经水浴、离心，得上清液，合并滤液、浓缩、冷却，醇沉，离心，沉淀物用Sevag试剂除蛋白，乙醚洗涤，冷冻干燥得鳞盖红菇菌丝体粗多糖，具体操作见文献［3］，将鳞盖红菇菌丝体粗多糖配制成20 mg/mL的溶液，4 ℃保存备用。?? 　　1.2.2肝癌小鼠模型的建立 　　在无菌条件下抽取接种传代7 d后的H22腹水型瘤源鼠腹水，用无菌生理盐水稀释成细胞悬液（含瘤细胞1×107个/mL），按0.2 mL/只接种于小鼠的左前腋下，接种后观察24 h动物行为无异常。所有小鼠接种肿瘤细胞后，均常规饮食。?? 　　1.2.3试验动物分组和取材 　　30只小鼠接种24 h后，称重，随机分多糖组、阴性对照组和阳性对照组，苦味酸标记，雌雄分笼，分组饲养。多糖组灌胃鳞盖红菇菌丝体多糖200 mg/kg/d，阴性对照灌胃生理盐水??0.3 mL/只/d，阳性对照组上午灌胃生理盐水??0.3 mL/只/d，下午腹腔注射5-Fu 20 mg/kg/d，连续10 d,每隔1 d称体重。停药次日处死小鼠，剖取瘤块。?? 　　1.2.4肿瘤抑制率的测定 　　将各组的瘤块称重，计算肿瘤抑制率。?? 　　肿瘤抑制率=（1-给药组平均瘤重/阴性对照组平均瘤重）×100%?? 　　1.2.5肿瘤组织Bcl-2和突变型P53蛋白的检测 　　制作瘤体切片并用免疫组织化学法进行检测（按试剂盒说明书操作），光学显微镜下观察Bcl-2和突变型P53蛋白的表达，随机计数3个高倍视野（400×）中阳性细胞百分率。?? 　　1.2.6统计数据处理 　　采用SAS9.1统计软件对数据进行统计，组间比较用??q??检验（??P ??＜ 0.05）。?? 　　2 结果与分析 　　2.1鳞盖红菇菌丝体多糖对肿瘤的抑制率 　　与阴性对照组比较，多糖与5-Fu均有抑瘤效果，抑瘤率分别为64.38%和84.62%（?┍?1）。 　　2.2鳞盖红菇菌丝体多糖对H22荷瘤鼠肿瘤组织Bcl-2和突变型P53蛋白的影响 　　与阴性对照组比较，多糖组与5-Fu组Bcl-2和突变型P53蛋白阳性率均降低，5-Fu组的突变型P53蛋白阳性率低于多糖组(表2)。H22肝癌肿瘤切片中P53和Bcl-2的表达见封三图1、2。?? 　　张 昆，等：鳞盖红菇菌丝体多糖对H22荷瘤小鼠Bcl-2和P53表达的影响 　　3 讨论 　　肿瘤的发生是多因素的结果，与癌基因及细胞凋亡有关。??bcl??-2是一种重要的凋亡基因，其基因产物Bcl-2蛋白可以抑制细胞凋亡［4］。??p??53基因是肿瘤抑制基因之一，分为野生型和突变型两种，突变型的??p??53可以抑制野生型的活性，导致细胞癌变［5］。一般用免疫组化法检测的P53蛋白均是突变型??p??53。已有实验报道真菌多糖可直接作用或通过癌