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利用CRISPR／Cas9技术建立斑马鱼Asb11基因敲除-湖南师范大学
第２７卷第３期 激 光 生 物 学 报 Ｖｏｌ．２７Ｎｏ．３
２０１８年６月 ＡＣＴＡ ＬＡＳＥＲ ＢＩＯＬＯＧＹ ＳＩＮＩＣＡ Ｊｕｎ．２０１８
利用 ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９技术建立斑马鱼
Ａｓｂ１１基因敲除品系
尹丽阳，罗世锋，陈 宇，漆轲婧，彭 云，万永奇，吴秀山，李永青
（湖南师范大学省部共建淡水鱼类发育生物学国家重点实验室，教育部重点实验室，
生命科学学院心脏发育研究中心，湖南长沙４１００８１）
摘 要：
Ａｓｂ１１基因被报道与斑马鱼Ｎｏｔｃｈ信号的激活有关，本研究室过去的研究显示该基因在心肌和骨骼肌
中特异性表达。因此推测Ａｓｂ１１基因可能是心脏发育相关候选基因。为了阐明Ａｓｂ１１基因在斑马鱼心脏发育过
程中的作用，本文利用ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９打靶技术构建敲除Ａｓｂ１１基因的斑马鱼品系。首先在线分析筛选出Ａｓｂ１１
基因最适合的打靶位点，然后ＰＣＲ扩增出Ａｓｂ１１基因ｇＲＮＡ的双链 ｃＤＮＡ，再将Ａｓｂ１１基因的ｇＲＮＡ和Ｈｃａｓ９的
ｍＲＮＡ共同注射到斑马鱼胚胎 细胞期胚胎中。进行打靶的有效性检测，发现Ａｓｂ１１基因的一号外显子出现了
Ⅰ
碱基的缺失，表明ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９系统对Ａｓｂ１１基因的敲除是有效的。对其 Ｆ０代、Ｆ１代、Ｆ２代进行筛选，成功获
得了Ａｓｂ１１基因敲除的斑马鱼品系，为探究Ａｓｂ１１在心脏发育中的作用奠定了基础。
关键词：
斑马鱼；Ａｓｂ１１基因；ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９
中图分类号： 文献标志码：
Ｑ７８ Ａ ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７７１４６．２０１８．０３．０１０
ＥｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇｔｈｅＡｓｂ１１ＫｎｏｃｋｏｕｔＬｉｎｅｓｏｆＺｅｂｒａｆｉｓｈｗｉｔｈ
ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ＴａｒｇｅｔｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
ＹＩＮＬｉｙａｎｇ，ＬＵＯＳｈｉｆｅｎｇ，ＣＨＥＮＹｕ，ＱＩＫｅｊｉｎｇ，ＰＥＮＧＹｕｎ，ＷＡＮＹｏｎｇｑｉ，ＷＵＸｉｕｓｈａｎ，ＬＩＹｏｎｇｑｉｎｇ
（ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌＢｉｏｌｏｇｙｏｆＦｒｅｓｈｗａｔｅｒＦｉｓｈ，ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＭｉｎｉｓｔｒｙ
ｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ，ＣｅｎｔｅｒｏｆＨｅａｒｔＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ＨｕｎａｎＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１００８１，Ｈｕｎａｎ，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：
Ａｓｂ１１ｇｅｎｅｗａｓｒｅｐｏｒｔｅｄｔｈａｔｉｔｗａｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＮｏｔｃｈｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ．Ｔｈｅｐｒｅｖｉｏｕｓｒｅ
ｓｕｌｔｓｉｎｏｕｒｌａｂｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｅｄｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙｉｎｃａｒｄｉａｃｍｕｓｃｌｅａｎｄｓｋｅｌｅｔａｌｍｕｓｃｌｅ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｉｔｗａｓｈｙ
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