黑麦热激蛋白ScHsp90―1基因克隆及表达分析.docVIP

黑麦热激蛋白ScHsp90―1基因克隆及表达分析 　　摘要：本研究从黑麦中克隆了一个热激蛋白Hsp90基因，暂命名为ScHsp90-1，并对其序列进行分析。结果显示，该基因cDNA序列全长2 103 bp，共计编码700个氨基酸，蛋白质分子量约80.47 kD。序列同源性分析表明，ScHsp90-1与小麦、玉米、水稻等物种的热激蛋白同源性较高；进化树分析表明ScHsp90-1与小麦的TaHsp90亲缘关系最近。利用实时荧光定量PCR技术对其表达特性分析表明，ScHsp90-1对高温、低温、高盐、干旱等非生物胁迫均有响应，其可能是黑麦的一个胁迫相关基因。 　　关键词：黑麦；热激蛋白Hsp90；克隆；表达分析 　　中图分类号：S512.5：Q781文献标识号：A文章编号：1001-4942（2018）03-0001-05 　　Abstract In this study， a Hsp90 gene was isolated from rye， named ScHsp90-1.The full cDNA sequence of ScHsp90-1 is 2 103 bp， which encodes 700 amino acids with a predicted molecular mass of 80.47 kD. The sequence analysis showed that ScHsp90-1 had higher homology with that of wheat， maize and rice. The phylogenetic analysis indicated that ScHsp90-1 was especially similar to TaHsp90 from wheat. The real-time quantitative PCR analysis showed that ScHsp90-1 had response to high-temperature， cold， high-salt and drought treatments in rye. These results indicated that ScHsp90-1 gene might be a stress-related gene of rye. 　　Keywords Rye； Heat-shock protein Hsp90； Cloning； Expression analysis 　　在受到高?鼗蚱渌?理化因素胁迫后，生物体内的热激蛋白（heat-shock protein， Hsp）会极速合成并积累，从而参与生物体内蛋白的折叠，防止体内蛋白聚合[1]。热激蛋白作为一类分子伴侣蛋白，根据其分子量大小可分为小分子量Hsps、Hsp60、Hsp70、Hsp90和Hsp110等不同家族。目前对Hsp90的研究相对较多，Hsp90家族在生物体内蛋白折叠、降解及各种条件下的生长发育等方面均起到了十分重要的作用；其底物蛋白也广泛参与了生物细胞信号的传导[2]。当生物遭受逆境胁迫时，Hsp90家族基因会迅速做出响应，发挥其保护作用，阻止相关蛋白变形或功能出现紊乱，进而维持生物的正常生长。 　　大量研究表明，Hsp90家族基因广泛参与植物对各类逆境胁迫的应答。拟南芥中7个Hsp90家族基因已经被成功克隆，其中AtHsp90.2、AtHsp90.3、AtHsp90.4的蛋白序列相似度达96%以上，功能也有一定的交叉重复[3]。有研究表明，在拟南芥植株中过表达AtHsp90.3，转基因植株对高钙离子浓度耐受能力增强，对高温及重金属离子的耐受性却变弱[4]；过表达AtHsp90.2、AtHsp90.5 和AtHsp90.7，转基因拟南芥植株对钙离子浓度的耐受性有所增强，但是对高盐和干旱的耐受能力却有所降低[5]。同时，在小麦和水稻上的研究证明，Hsp90在胁迫环境响应及抗病性中也具有非常重要的作用[6，7]。 　　黑麦作为小麦的近缘物种之一，有许多可利用的条锈病、腥黑穗病、白粉病等抗性基因，与产量相关的大穗、多小穗性状，较高的蛋白质含量等；并且耐低温、耐干旱、耐土壤酸性[8]。目前对黑麦DNA重复序列及遗传连锁图谱构建的研究相对较多，而对其优异基因的挖掘却较少。为此，我们利用构建的NTT系统及后差减剔除技术[9]，获得了黑麦热激蛋白Hsp90家族基因的EST序列，本试验在前期研究的基础上克隆到一个基因全长（GenBank accession no. JQ685506.1），暂定名为ScHsp90-1。对ScHsp90-1蛋白序列进行生物信息学分析，进一步明确该基因的序列特征；并通过实时荧光定量PCR技术，对ScHsp90-1基因