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生防菌株GD―2与HZ―31生长特性分析 　　摘要：真菌GD-2和HZ-31是2株分离于杂草中的具有生防潜力的生防菌株，为进一步研究2株菌株的发酵培养及田间应用技术，进行了生防菌株生长特性研究。通过室内PAS培养基培养，装液量为100 mL/250 mL，培养温度（25±1） ℃，培养10 d，观察测定培养过程中发酵液颜色、菌丝干重变化、OD650 nm和pH，并利用聚类分析方法划分生防菌株生长阶段。结果表明，在培养过程中，生防菌株发酵液的颜色、菌丝干重、OD650 nm 和pH 都会随着培养时间而变化。在相同的培养条件下，来源于不同寄主的生防菌菌株之间在颜色、菌丝干重变化、OD650 nm和pH 变化表现出差异。2株生防菌菌株的生长分为3 个阶段，1～2 d 为适应阶段，3～5 d 为对数生长阶段，6～10 d为稳定阶段。生防菌株在培养过程的发酵液色素变化和OD650 nm的变化可作为生防菌株培养的表征性特征。 　　关键词：生防菌株；生长特性；分析；GD-2；HZ-31 　　中图分类号：S476+.1 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2014）22-5408-03 　　真菌在生长、产孢、萌发时对营养和环境条件都有其基本的和特殊的需求，了解真菌生长、产孢和萌发的具体特性和要求，对植物真菌病害的研究具有重要意义。不同真菌在不同地区的分布又有所不同，这种差异反映了生防菌对生长环境的选择，表现在其对不同环境利用的生长特性上。在特定的培养条件下，真菌发酵液的颜色、菌丝干重、发酵液吸光度和pH等的变化，都能反映真菌的生长特性。针对筛选出的具有良好生防潜力的2株真菌，研究生长特性，了解适宜培养条件，对进一步研究该菌株的生物防治应用具有重要意义。菌株GD-2和HZ-31是青海省农业有害生物综合治理重点实验室筛选出的对野燕麦具有防除效果的生防菌株[1，2]，本研究对该生防菌株的生长特性进行了研究，有助于了解其培养特性的差异，寻找培养过程的异质性指标，为进一步的生物学研究发酵生产、制剂研制及田间应用等奠定基础。 　　1 材料及方法 　　1.1 试验材料 　　菌株：供试菌株及来源见表1。 　　培养基：固体培养基为PDA培养基（马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂20 g，水1 000 mL）； 液体培养基为PSA培养基 （马铃薯200 g，蔗糖20 g，水1 000 mL）。 　　1.2 试验方法 　　生防菌株培养：将生防菌在 PDA 平板上培养7 d，打取 3 个 6 mm 的菌片，置于盛有 100 mL PSA 液体培养基的250 mL 三角瓶中培养，培养温度为（25±1） ℃，摇床转速为 110 r/min，每天取 3 瓶，过滤菌丝，收集发酵液。 　　观察测定：①观察生防菌株生长过程发酵液颜色的变化。②测定生防菌株生长过程菌丝干重的变化。收集发酵液在5 000 r/min离心15 min， 倒掉上清液后菌体用去离子水洗涤，离心，反复3次后放到50 ℃的烘箱中烘至恒重，在分析天平上准确称重。③测定生防菌株生长过程OD650 nm的变化。将发酵液5 000 r/min离心，取上清液，用UV751GD型分光光度计（上海精科）测定OD650 nm。④测定生防菌株生长过程中pH的变化，分析生防菌株的生长特性。 　　分析生防菌株的生长阶段，以生防菌株培养时间为分类，以菌株GD-2和HZ-31的菌丝干重、OD650 nm、pH为指标，构建矩阵。以欧氏距离为相关尺度，用类平均法进行聚类分析。 　　1.3 统计分析 　　采用Eecel软件作图，DPS软件进行数据分析。 　　2 结果与分析 　　2.1 生防菌株生长过程发酵液颜色的变化 　　2株生防菌株在培养过程颜色变化不同。发酵液颜色会发生阶段性变化，在发酵初期（1～3 d），生防菌菌株GD-2和HZ-31的发酵液颜色与培养基配制时的颜色相同，没有明显的变化。在发酵中期（4～6 d），2株菌株发酵液的颜色发生明显变化，菌株GD-2 发酵液在4 d 时变为奶黄色，在6 d 时颜色加深，转变为黄褐色；而菌株HZ-31 发酵液在4 d 时则变为淡黄色，在6 d 时颜色加深转变为深黄色。在发酵后期（7 d以后），2株生防菌发酵液保持发酵6 d 时的颜色，没有明显变化。 　　2.2 生防菌株生长过程中菌丝干重的变化 　　菌株GD-2和菌株HZ-31培养过程中菌丝干重的变化趋势相差较大，2株菌株的菌丝干重增加量情况存在较大差异（图1）。菌株GD-2菌丝干重增加量最大的时间为5～8 d，8 d 时的菌丝干重达到最大值（499.8 mg/100 mL），随后的变化趋于平缓。而菌株HZ-31增加量最大的时间为1～4 d；4 d 时的菌丝干重达到最大值，为834.4 mg/