动物细胞生物反应器关键技术研究及其结构优化-机械制造及其自动化专业论文.docx

摘 要 牛顿力学统治了世界几百年，未来生物技术将成为主导 21 世纪科学技术 发展的关键力量。生物反应器是人类进行生物目标产品开发及生产的关键设备。 我国在生物反应器的开发研究中存在基础理论研究投入少、细胞的剪切敏感性 认知不足、半经验方式设计、反应器效能低下、仿制国外低端产品等问题。针 对这些问题，本文从 CHO 细胞入手，CHO 细胞即中国仓鼠卵巢细胞，是动物 细胞工程产业应用最为广泛的细胞之一，首先对 CHO 细胞力学特性进行了研 究；以其力学特性为基础分别对生物反应器的搅拌器、罐体结构、温度维持、 供料位置进行仿真优化；气泡分布器作为生物反应器中的供氧装置十分关键， 但生成的气泡直径不好度量以及破裂过程中高速剪切损伤细胞，通过仿真及实 验方法使得这些问题得到很好的解决；本文提出一种新的方法——剪切率参量 法，在未制造样机的前提下，利用现有设备可以对新研制反应器剪切环境进行 验证评价，剪切率参量法验证方法简单可靠，缩短研发周期，节约成本。 为了给生物反应器设计提供基础性的依据，借助原子力显微镜，对 CHO 细胞进行成像及力学测量，测量得到生理状态 CHO 细胞的弹性模量为 5.278 ±0.395kPa，借助数值计算及细胞培养实验分析 CHO 细胞在生物反应器中的 受力环境，得到 CHO 细胞培养时能够承受的合理的剪切力约为 0.392Pa，此 时流场剪切率为 391.41(1/s)，在此剪切应力作用下对于 20μm 的细胞来说 U 方 向的最大位移量大约为 12.9μm。为反应器的设计中解决流体剪切的问题提供 依据。 规模化细胞培养生物反应器研发主要需要解决两个关键要素，首先是保证 流场混合的均匀性，同时要解决好流场剪切力对细胞的影响，以 CHO 细胞承 受的合理剪切力为参考，在降低流场剪切作用以及满足流场混合效果的前提下， 优化后的反应器结构采用 45o 叶片夹角的 Elephant Ear 搅拌器，下吸式安装， 罐体高径比 为 1、罐底半径 为罐体直径的一半为 、搅拌器安装高度与 罐体高度比 为 、挡板数量为 3 对，此优化结构流场效果最好。细胞培养 过程中温度需要严格控制，建立该反应器的温度场仿真模型，对三种供热保温 结构进行对比仿真分析，表明当采用整体壁面加热时，反应器内的流体能较快 的达到温度均衡。反应器供料位置对物料混合效果影响明显，利用示踪剂法， 找到反应器较优的供料位置，缩短混合时间。 气泡分布器作为反应器的供氧装置用于生成气泡，在细胞培养过程中气泡 在分布器孔口形成上升破裂主要与三个参量有关，通过研究得到了一定范围内 气泡平均直径大小与孔口通气速度、表面张力系数和孔口直径之间的关系式。 定量角度分析了直径在 4mm-10mm 范围内变化的气泡破裂过程中产生的 在 0.97-1.91Pa 之间变化，根据 CHO 细胞的承受的最大剪切力为 0.392Pa 左右， 可知在此范围的气泡破裂过程中均会造成细胞的损伤。而气泡越小，气液表面 积比越大，这样反应器内溶氧越好，为了满足细胞培养过程中的溶氧需求，因 此气泡直径控制在 4mm 左右为宜。气泡分布器安装时通气孔离生物反应器底 部的距离对气含率的影响不大，大分布环的使得气含率更加均匀，而且大分布 环通气结构能有效防止气体直接由搅拌器区直接上升至液面溢出，降低气含率， 所以实际应用中可以根据需要应尽量选用大分布环气泡分布器。 生物反应器设计制造中的需要解决的关键问题之一就是流场混合过程中产 生的剪切力对细胞的损伤，反应器研发初期很难对这一问题进行度量验证，一 般通过制造样机进行实验验证，一种新的验证方法剪切率参量法应运而生，它 可以在现有实验室设备的基础上通过实验和仿真方法，使得这一问题得到解决。 针对本论文提出的多项技术，设计了反应器实验系统，利用该实验系统验证了 本文提出的剪切率参量法，当采用上通气的情况下，转速为 180r/min 时，细 胞密度增量最大，其主流场区域平均剪切率为 14.5，符合本文提出的剪切率 参量法的适宜细胞生长的平均剪切率范围 11.6~17.4（1/s）；实验系统包括搅拌 器、罐体结构、加热保温装置、气泡分布器均采用本文的优化结果，在此结构 参数下采用上通气转速在 180r/min 时可以获得较好的培养效果，当采用下通 气转速为 80r/min 时气泡直径为在 4~8mm 范围获得较好的培养效果，其性能 与美国 NBS 商品化生物反应器相近。 本文对 CHO 细胞生物反应器的关键技术进行了研究，得到了 CHO 细胞 的力学特性、反应器结构及其流场效果、气泡分布器结构及气泡生成破裂过程， 反应器剪切率参量验证方法等研究成果，为 CHO 细胞规模培养生物反应器的 实用化奠定了基础。 关键词：生物反应器